通络方干预冠脉微栓塞大鼠心肌细胞凋亡作用及机制研究

摘要

目的： 应用介入法经右颈总动脉注入自体血栓建立大鼠冠状动脉微栓塞模型，研究通络方干预大鼠冠状动脉微栓塞心肌细胞凋亡的作用及其机制。 方法： 1.自体血栓模型和微栓塞球模型比较：36只雄性wistar大鼠随机分为空白组（n=6）、假手术组（n=10）、自体血栓组（n=10）、微栓塞球组（n=10）。用介入法向大鼠主动脉根部分别注入0.5ml自体血栓、微栓塞球，建立大鼠冠状动脉微栓塞自体血栓模型和微栓塞球模型。于术后24h，对各组大鼠行阳性微栓塞血管数目、缺血心肌面积检测。 2.通络方的高效液相质量控制：通络方水煎浓缩液，用高效液相色谱分析。分别制备毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芍药苷、人参皂苷Rb1的对照品溶液与供试品 溶液，根据对照品制作标准曲线，进行精密度试验、重复性试验、稳定性试验、加样回收率试验，并测定样品含量。 3.通络方干预冠脉微栓塞大鼠心肌细胞凋亡：46只雄性wistar大鼠随机分为空白组（n=6）、模型组（n=10）、通络方低剂量组（n=10）、通络方高剂量组（n=10）、通心络组（阳性对照，n=10）。介入法建立自体血栓冠状动脉微栓塞模型。通络方低剂量组、通络方高剂量组分别予以低、高剂量通络方灌胃，通心络组予以通心络灌胃。干预12天后，对各组大鼠进行心功能、阳性微栓塞血管数目、心肌缺血面积、心肌细胞凋亡水平检测。 结果： 1.CME模型建立后，自体血栓组、微栓塞球组阳性微栓塞血管比率、缺血心肌面积比率明显增高（P﹤0.05）。与微栓塞球组比较，自体血栓组阳性微栓塞血管比率、缺血心肌面积比率增高（P﹤0.05）。 2.通络方水煎液中黄芪、赤芍、红参的待测组分分离度良好，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芍药苷、人参皂苷Rb1含量分别为为75.67μg/g，5432.33μg/g，350.59μg/g。 3.与模型组比较，通络方低剂量组、通络方高剂量组、通心络组阳性微栓塞血管计数比率、缺血心肌面积比率、心肌细胞凋亡率降低（P﹤0.05），心肌细胞中bcl-2蛋白表达、bcl-2/bax比值有所升高，bax、caspase-3蛋白表达降低（P﹤0.05）；通络方低剂量组心功能有所改善（P﹥0.05），通络方高剂量组、通心络组心功能明显好转（P﹤0.05）。与通心络组比较，通络方低剂量组、通络方高剂量组心功能改善程度偏低（P﹥0.05），但缺血心肌面积比率降低明显；通络方高剂量组阳性微栓塞血管计数比率、心肌细胞凋亡率、bcl-2、bcl-2/bax降低较通络方低剂量组明显，但差异无统计学意义（P﹥0.05）；但通络方低剂量组、通络方高剂量组bcl-2、bcl-2/bax比值略高（P﹤0.05）；通络方高剂量组bax、caspase-3蛋白表达有所降低，但差异无统计学意义（P﹥0.05）。 结论： 1.通过导管介入法注入微球也能成功建立大鼠CME模型，但自体血栓造模方式效果更好。2.通络方可通过阻断线粒体凋亡途径抑制CME大鼠心肌细胞凋亡，改善心功能。

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