油橄榄叶抗氧化与降糖降脂活性研究

摘要

油橄榄叶的生物活性与活性物质的种类及含量密切相关，而油橄榄叶中活性物质的种类和含量受油橄榄品种、生长环境和采摘时间等的影响，还会因干燥、提取等后处理方式的不同而不同；评价方法与机制不同，生物活性评价结果也会有差异。本文以水为溶剂，对采自同一时间、同一区域、相同树龄的19种油橄榄叶，通过化学和细胞学方法全面、系统地评价了其抗氧化活性，并对其抑制ɑ-淀粉酶的活性进行了评价，分析了其活性物质的含量，研究了含量与活性之间的关系；并通过动物实验进一步研究了油橄榄叶提取物的降糖降脂活性。为油橄榄叶及其相关产品的开发利用提供实验基础与理论依据。主要研究内容如下： （1）清除DPPH·与铁还原能力 以VC和橄榄苦苷为阳性对照，19种油橄榄叶均有清除DPPH·与铁还原的能力。清除DPPH·与铁还原能力大小为维生素C>橄榄苦苷>19种油橄榄叶，清除DPPH·的IC50值依次为9.66μg/ml、43.65μg/ml、0.24 mg/ml~0.69 mg/ml，19种油橄榄叶中以科新佛奥清除DPPH·的能力为最强，贝拉为最弱；当浓度为16μg/ml时，VC、橄榄苦苷铁还原能力分别相当于FeSO4的142.09μmol/L、106.00μmol/L；当浓度为0.3 mg/ml时，19种油橄榄叶铁还原能力相当于FeSO4的108.90μmol/L~282.23μmol/L，以希腊-3为最强，阿尔波萨拉为最弱。19种油橄榄叶清除DPPH·与铁还原的能力差别较大，RSD%分别为25.83%、25.28%。 （2）抑制红细胞溶血活性 以VC和橄榄苦苷为阳性对照，19种油橄榄叶均有抑制红细胞溶血的活性。抑制红细胞溶血能力的大小为维生素C>橄榄苦苷>19种油橄榄叶提取物，VC、橄榄苦苷抑制红细胞溶血的IC50值为23.56μg/ml、39.52μg/ml，19种油橄榄叶抑制红细胞溶血的IC50值为0.75 mg/ml~2.41 mg/ml，以切姆拉尔为最强，以贝拉为最弱。19种油橄榄叶对红细胞溶血抑制作用差别较大，RSD%为30.79%。 （3）ɑ-淀粉酶抑制活性 以阿卡波糖为阳性对照，阿卡波糖浓度为0.8 mg/ml时，α-淀粉酶的抑制率达到50%。20 mg/ml时，19种不同油橄榄叶提取物对α-淀粉酶均有抑制作用，抑制率为1.32%~46.95%，以科新佛奥为最强，以阿尔波萨拉为最弱。19种油橄榄叶对α-淀粉酶的抑制作用差别较大，RSD%为73.17%。 （4）活性成分分析 19种油橄榄叶中橄榄苦苷的含量为1.69 g/kg~33.65 g/kg，以城固32号含量最高，贝拉含量最低；总黄酮含量为4.98 g/kg~9.44 g/kg,以鄂植8号含量最高，莱星含量最低；木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量为0.43 g/kg~1.51 g/kg，以鄂植8号含量最高，科新佛奥含量最低；芹菜素-7-O-葡萄糖苷含量为（33.32~317.87）×10-3 g/kg，以华欧9号含量最高，科基含量最低；19种油橄榄叶中芹菜素-7-O-葡萄糖苷、橄榄苦苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、总黄酮含量差别较大，RSD%分别为64.98%、63.50%、35.76%、16.93%，品种对芹菜素-7-O-葡萄糖苷、橄榄苦苷含量的影响较大。油橄榄叶中橄榄苦苷、总黄酮及相互作用与DPPH·清除率存在多重线性关系（R2=0.5314，P<0.05）；橄榄苦苷、总黄酮与铁还原能力存在多重线性关系（R2=0.7，P<0.05）；橄榄苦苷、橄榄苦苷与总黄酮的相互作用与红细胞溶血抑制率存在多重线性关系（R2=0.4301，P<0.05）；橄榄苦苷与ɑ-淀粉酶抑制活性存在线性关系（R2=0.2109，P<0.05）；DPPH·清除率与ɑ-淀粉酶抑制活性存在线性关系（R2=0.4764，P<0.05）。 （5）油橄榄叶提取物对T2DM大鼠血糖血脂的影响 以二甲双胍为阳性药。给予油橄榄叶提取物后，500、250、125 mg/kgBW剂量组大鼠血糖显著下降（P<0.05）；油橄榄叶提取物显著改善T2DM大鼠葡萄糖及胰岛素耐量，增强大鼠对胰岛素的敏感性（P<0.05）；油橄榄叶提取物可降低血液中T2DM大鼠TG、TCHO、NEFA，LDL-C、GSP的含量，达到调节血脂的作用；与二甲双胍组比较，油橄榄叶提取物高剂量组可升高HDL-C含量（P<0.05）。实验结果表明，油橄榄叶提取物有降糖降脂的作用。

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研 究 生 学 位 论 文

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目 录

1.2.1 溶液的制备9

2.4 结论21

2.3 油橄榄叶中总黄酮的测定27

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致 谢49

第一章 前言

油橄榄(Olea europaea L.)属木犀科(Olea ceae) 木犀榄属（Olea Lin

1. 油橄榄叶研究进展

1.1油橄榄叶的营养成分及生物活性物质

1.3油橄榄叶的提取

1.4油橄榄叶的应用

2.抗氧化及抗氧化活性评价

2.1 抗氧化简介

2.2 抗氧化活性评价方法

3.本论文主要研究内容

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1.3 结果与讨论

1.3.1 DPPH自由基清除能力

1.3.2 FRAP铁还原能力

1.4 结论

2. 红细胞溶血抑制实验

2.1 试剂、仪器与样品

2.2 方法

2.3 结果和讨论

2.4 结论

3 α-淀粉酶抑制实验

3.1试剂、仪器与样品

3.2 方法

3.3 结果和讨论

3.4 结论

1.3 材料

2. 方法

2.1 溶液的制备

2.2油橄榄叶的提取

2.5 数据处理与分析

3. 结果和讨论

3.1 标准曲线的绘制

3.2 提取次数与时间的选择

3.3 抗氧化活性物质的测定结果

3.4 活性物质含量与DPPH·清除率之间的关系

3.5 活性物质含量与铁还原之间的关系

3.6活性物质含量与红细胞溶血抑制率之间的关系

3.7 活性物质含量与α-淀粉酶抑制率之间的关系

3.8 抗氧化活性与α-淀粉酶抑制率之间的线性关系

4. 结论

第四章油橄榄叶提取物对2型糖尿病大鼠血糖血脂

影响的研究

1.材料和方法

1.1试验药物

2. 方法

2.1 空腹血糖

2.3 胰岛素耐量

2.4 胰岛素含量及胰岛素敏感指数

2.5血清血脂及糖化血清蛋白（GSP）含量

2.6 数据处理

3. 结果

3.1 对空腹血糖的影响

3.2 对大鼠糖耐量的影响

3.3 对大鼠胰岛素耐量的影响

3.5 对大鼠血清血脂及糖化血清蛋白的影响

3.6 讨论

4 结论

参考文献

在学期间的研究成果

一．发表论文

[1].Hu Q, Wei J, Liu Y, Fei X, et al. Discovery and id

[2].费秀兰,孙小明,黄新异,等.油橄榄叶提取物对2型糖尿病大鼠血糖血脂影响的研究[J].中药药理与临床（

[3].费秀兰,何海荣,陈汉哲,等.橄榄苦苷代谢物羟基酪醇的大鼠尿药动力学研究[J].食品科学（在投）.

二．参与课题

1.油橄榄多酚软胶囊的研制

2.中科院战略性先导科技专项-基于疾病分子分型的普惠新药研发子课题(XDA12050300)

3.

致 谢