致敏树突状细胞联合细胞毒性T细胞治疗恶性胶质瘤的实验研究

摘要

目的:探讨致敏树突状细胞(Dendritic cells，DC)联合细胞毒性T细胞(cytotoxicT lymphocytes，CTL)对恶性胶质瘤的治疗作用。
　　方法:分离培养SD大鼠骨髓来源的DC并用C6胶质瘤细胞冻融抗原致敏，通过流式细胞仪检测大鼠DC特异性标志OX62的表达情况;培养大鼠脾脏来源的T淋巴细胞，用负载C6细胞抗原的DC诱导T细胞活化为CTL;用CCK-8法检测致敏DC对T淋巴细胞增殖的刺激能力以及CTL对C6胶质瘤细胞的体外杀伤能力。制作SD大鼠颅内C6胶质瘤模型并分为4组:致敏DC治疗组、CTL治疗组、致敏DC联合CTL治疗组和对照组。从建模后第三天开始对大鼠进行免疫治疗，之后每周加强注射一次，共治疗4次。治疗过程中对荷瘤鼠的生存质量进行跟踪评价，第21天行MRI检查计算各组大鼠肿瘤的体积，分析各组大鼠的生存时间和存活率，并取脑组织做病理学检查了解各组治疗方式对肿瘤细胞生长情况的影响。对数据进行统计分析以比较各组件的疗效是否有差异，分析联合致敏DC和CTL治疗恶性胶质瘤的效果。
　　结果:培养的DC经流式细胞仪检测OX62阳性率在85％以上;致敏的DC能够有效刺激T淋巴细胞增殖，诱导CTL的分化，获得的CTL对C6细胞具有显著的杀伤的作用;联合致敏的DC和CTL治疗的胶质瘤大鼠，MRI测得颅内肿瘤体积明显小于DC治疗组(P＜0.01)和CTL治疗组(P＜0.05)，中位生存期明显长于单纯CTL治疗组大鼠(P＜0.01)。病理检查结果:肉眼可见DC联合CTL治疗组大鼠的脑肿胀以及瘤体的浸润程度均较其它组轻微，其中有40％的大鼠肉眼未见肿瘤;切片行HE染色及免疫组化发现联合治疗组较其它组肿瘤细胞减少，肿瘤组织内血管增生及GFAP表达水平有不同程度的下降。
　　结论:致敏DC联合CTL治疗大鼠恶性胶质瘤效果较显著，且疗效优于单独使用DC或CTL治疗组。