糖皮质激素与吩噻嗪类药物的超高压液相色谱质谱联用分析与药物代谢研究

摘要

当前，食品、药品安全事件频发，由此造成的危害以及安全隐患严重危害大众的身体健康与生命安全，影响社会经济秩序。食品安全已经成为一个全球性的问题，如何完善食品安全检验检测体系，加强食品安全国际协作与发展等问题已成为食品行业发展的重中之重。 糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，在临床上用途十分广泛。目前人们在喂养牲畜中常加入此药作为动物生长调节剂，以达到促进动物蛋白质合成与代谢，从而增加产肉量的目的，此药在食品中残留会给人体健康带来危害。吩噻嗪类药物是一种比较常见的神经性药物，它们主要作用于大脑网状结构，以减轻焦虑紧张、幻觉妄想和病理性思维等精神症状。其在兽医临床上的药理作用广泛，饲料中添加此类药物，可间接起到催肥作用；另外，使用吩噻嗪类药物可减少动物运输过程中的死亡率。因该类药物脂溶性高，易蓄积于脂肪组织，停药后数周乃至半年后，尿中仍可检出其代谢物，且部分代谢物仍具有药物活性。残留的的药物能引起白细胞减少和粒细胞缺乏症，从而引起人体肝脏、肾脏的病变，还会引起眼部并发症等。目前这些药物在养殖业中的使用已经引起了美国、欧盟和日本等国家的高度重视。 本论文发展了超高效液相色谱-电喷雾电离串联四级杆质谱分别对糖皮质激素、吩噻嗪类药物的检测方法。借助飞行时间质谱，论文对氯丙嗪、异丙嗪这两种吩噻嗪类药物在大鼠的体内、体外代谢进行了研究。 本论文由四部分组成：1.文献综述；2.液质联用检测糖皮质激素类药物地塞米松、倍他米松、倍氯米松；3.固相萃取超高效液相色谱-电喷雾串联质谱对动物源食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物氯丙嗪亚砜和异丙嗪亚砜的测定；4氯丙嗪，异丙嗪等药物的体内和体外代谢物的分析及动力学表征。 第一章文献综述，主要介绍了食品安全问题，吩噻嗪类药物的性质，用途，毒害和常用的检测方法以及代谢组学方面的知识，并对药物的体内体外代谢物研究的现状及意义进行了分析，并在此基础上提出了本论文的研究设想。 第二章建立了猪肉中糖皮质激素类药物地塞米松、倍他米松、倍氯米松同时测定的超高效液相色谱-电喷雾电离串联四级杆质谱(UPLC-MS-MS)方法，对样品前处理方法进行改进，确定了最佳提取剂。实验采用多反应监测(MRM)正离子模式，超高压反相C18色谱柱分离，梯度洗脱，对猪肉中的地塞米松、倍他米松、倍氯米松进行定性和定量测定。在质量浓度1～100μg/L范围内具有良好的线性。方法的回收率在83％～96％之间，定量线(S/N>10)地塞米松、倍他米松和倍氯米松分别为1μg/kg、1μg/kg、2μg/kg。 第三章发展了一种固相萃取超高效液相色谱-电喷雾串联质谱方法对动物源食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物氯丙嗪亚砜和异丙嗪亚砜进行了测定。目前有关动物源性食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物的测定方法还较少，大部分研究都局限于法医学方面。随着我国加入WTO，迫切需要制定一些先进、准确的测定方法。本方法采用乙酸乙酯提取，经固相萃取，由UPLC-MS-MS测定，外标法定量动物源性食品中吩噻嗪类药物及其代谢物。所建立的方法具有快速、准确、抗干扰能力强的特点，其定量限(S/N>10)氯丙嗪、异丙嗪为5μg/kg，氯丙嗪亚砜、异丙嗪亚砜为1μg/kg，满足动物源性食品中吩噻嗪类药物及其代谢物检测的国际标准。 第四章对氯丙嗪，异丙嗪代谢的研究及代谢产物进行了表征。本部分的研究通过体外试验(invitro)和体内试验(invivo)两种方法。体外试验是提取了大鼠的肝脏，采用肝微粒体(microsome)等体系模拟动物体的肝代谢系统，药物在该体系中进行代谢反应，通过反应结果对代谢进行评估。体内试验中将药物灌喂到大鼠体内，通过对大鼠排泄物、血液、肝脏中药物及其代谢物的测定对药物及其代谢成分进行分析。 本文的创新点在于： (1)对糖皮质激素类药物地塞米松、倍他米松、倍氯米松的测定方法进行摸索，建立了超高压液相色谱串联电喷雾质谱的检测方法，操作简单快速，灵敏度高。 (2)对动物源食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物氯丙嗪亚砜和异丙嗪亚砜进行分析，建立了新的分析方法。对吩噻嗪类药物氯丙嗪、异丙嗪的体内、体外代谢进行了研究，找出了新的代谢产物，了解了药物的代谢过程。为此类药物的安全评价提供了一定的参考价值。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1引言

2食品安全问题与检测

2.1食品安全与评价

2.2食品分析与检测

3吩噻嗪类药物

3.1吩噻嗪类药物的性质与应用

3.2氯丙嗪、异丙嗪的检测

4代谢组学的应用

4.1样品的采集与制备

4.2代谢数据的采集

5液相色谱及液相色谱-质谱联用技术在代谢研究中的应用

5.1液相色谱

5.2质谱技术

5.3液相色谱-质谱联用技术

6大鼠代谢的研究

6.1体外肝脏代谢

6.2体内代谢

7实验规划

参考文献

第二章糖皮质激素的检测

1引言

2实验部分

2.1主要试剂

2.2主要仪器

2.3标准工作液的配制

2.4实验步骤

3结果与讨论

3.1仪器条件

3.2色谱条件的选择

3.3质谱条件的优化

3.4样品提取方法的选择

3.5线性关系

3.6回收率与检出限

4小结

参考文献

第三章 固相萃取超高效液相色谱-电喷雾串联质谱对动源食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物氯丙嗪亚砜和异丙嗪亚砜的测定

1引言

2实验部分

2.1仪器与试剂

2.2标准储备液的配制

2.3实验步骤

2.4仪器工作参数

3结果与讨论

3.1色谱条件的选择

3.2质谱解析及质谱条件的优化

3.3样品提取方法的选择

3.4线性关系和检出限

3.5回收率与精密度

3.6实际样品的测定

3.7结论

参考文献

第四章高效液相色谱—电喷雾串联质谱联用技术用于氯丙嗪，异丙嗪代谢物的鉴定、表征及药效性研究

1引言

2实验部分

2.1主要试剂与材料

2.2主要仪器

2.3鼠肝微粒体(microsome)组分的制备

2.4体外实验(in vivo)以及样品制备

2.5体内试验(in vivo)以及样品的制备

2.6大鼠代谢研究

3结果与讨论

3.1操作步骤

3.2氯丙嗪代谢物的鉴定与表征

3.3异丙嗪代谢物的鉴定与表征

3.4氯丙嗪、异丙嗪体内代谢药效性研究

3.5小结

参考文献

展望

在学期间发表的论文

致谢