三氧化二砷对CIA模型大鼠NF-κB信号的调控作用及NF-κB信号与老年类风湿关节炎患者中医证型的相关性

摘要

第一部分三氧化二砷对CIA模型大鼠NF-κB信号的调控作用
　　目的:通过建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠，探讨三氧化二砷(AS2O3)抗炎作用及对NF-κB信号的调控机制。
　　方法:将60只健康清洁级Wistar大鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、雷公藤对照组及AS2O3低、中、高剂量治疗组，除空白对照组外，其余各组建立CIA模型，于造模第1天开始给药，连续用药4周后用3％乌拉坦腹腔注射麻醉后，股动脉取血并分离血清，处死大鼠，剥除后肢膝关节皮肤，分离滑膜及关节软骨，苏木精-伊红染色法光镜下观察关节及滑膜的病理改变，酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达，免疫印迹杂交法(Western-Blot)检测NF-κB信号蛋白的表达。
　　结果:
　　1.成功构建了CIA大鼠模型。与空白对照组比较，模型组关节肿胀率明显升高;各治疗组与模型对照组同一时间点相比，关节肿胀率明显减轻; AS2O3低、中剂量治疗组与雷公藤对照组相比无统计学差异; AS2O3高剂量治疗组关节肿胀率低于与雷公藤对照组，具有统计学差异。
　　2与空白对照组相比，模型对照组IL-1β、TNF-α表达升高;与模型对照组相比，各治疗组IL-1β、TNF-α表达均有表达有不同程度下降，AS2O3高剂量治疗组降低最明显，与雷公藤对照组相比具有统计差异。
　　3.与空白对照组相比，模型对照组NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白活性升高;各治疗组与模型对照组相比，NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白活性降低;AS2O3高剂量治疗组降低更明显，与雷公藤对照组相比具有统计学差异。
　　结论:AS2O3能减轻CIA大鼠关节肿胀，降低滑膜淋巴细胞浸润，下调血清致炎因子IL-1β、TNF-α的表达和NF-κB/P65、NF-κB/P50蛋白活性。
　　第二部分 NF-κB信号与老年RA患者中医证型的相关性
　　目的:探讨老年类风湿关节炎(RA)患者炎性活动指标及核因子kappaB(NF-κB)信号与中医证候分型的相关性。
　　方法:收集2014年1月到2014年12月贵阳中医学院第二附属医院风湿免疫科住院或门诊的60例老年RA患者，根据中医辨证分型标准进行辨证分型，并检测患者的炎性指标C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率(ESR)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、类风湿因子(RF)及NF-κB/P65、NF-κB/P50信号蛋白的表达情况，评价其与中医证型的相关性。
　　结果:
　　1.NF-κB/P65、NF-κB/P65检测结果显示湿热痹阻证表达水平最高，与寒湿痹阻证、肾气虚寒证、肝肾阴虚证和瘀血痹阻证比较有统计学差异。
　　2.CRP和ESR检测结果以湿热痹阻型升高最为明显，与瘀血痹阻证和肾气虚寒证比较具有统计学差异(P＜0.01); CRP检测结果由高到低的顺序为湿热痹阻证＞寒湿痹阻证＞肝肾阴虚证＞肾气虚寒证＞瘀血痹阻证。ESR检测结果由高到低的顺序为湿热痹阻证＞寒湿痹阻证＞肝肾阴虚证＞瘀血痹阻证＞肾气虚寒证。
　　3.抗CCP抗体检测结果以湿热痹阻证为最高，与寒湿痹阻证、肾气虚寒证、肝肾阴虚证、瘀血痹阻证比较具有统计学差异;抗CCP检测结果由高到低排列为湿热痹阻证＞瘀血痹阻证＞肝肾阴虚证＞寒湿痹阻证＞肾气虚寒证。
　　4.RFIgM、RFIgG检测结果以湿热痹阻证升高最为明显，与寒湿痹阻证、瘀血痹阻证比较具有统计学差异;RFIgA检测结果在各证型间两两比较无统计学意义。
　　结论:
　　1.老年RA患者NF-κB信号蛋白的表达在中医湿热痹阻证中升高最明显，在肾气虚寒证中最低。
　　2.老年RA患者CRP、ESR等炎性指标及抗CCP抗体、RF在湿热痹阻证中升高最明显，可能与急性活动期湿热痹阻证发病较高有关。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 三氧化二砷对CIA模型大鼠NF-κB信号的调控作用

1．3 主要仪器设备

1．4 试验药物

2 研究方法

2．2 试剂配制

2．3 造模方法

2．4 给药方法

2．5 标本取材

2．6 观察指标

3 研究结果

3．1 大鼠一般情况观察

3．2 各组大鼠关节肿胀率比较

3．3 滑膜组织病理学形态改变

3．4 ELISA检测IL-1β及TNF-α结果

3．5 Western-Blot检测滑膜组织NF-κB／P65、NF-κB／P50、IκBα结果

4 讨论

第二部分 NF-κB信号与老年RA患者中医证型的相关性

1．2 诊断标准

1．4 病例排除标准

2 研究方法

2．2 检查指标

2．3 材料与试剂

2．4 统计分析方

3 研究结果

3．1 NF-κB信号与RA中医证候分型的关系

3．2 CRP、ESR与RA中医证候分型的关系

3．3 抗CCP抗体与RA中医证候分型的关系

3．4 RF与RA中医证候分型的关系

4 讨论

总结与展望

参考文献

附录一 缩略语表

附录二 综述

致谢

附录四 个人简历