Ming氏膨胀型胃癌细胞系的建立

摘要

目的: 建立Ming氏膨胀型胃癌细胞系，探讨其生物学特性，为利用Ming氏分型研究胃癌的发生机理提供一个实验模型。
　　 方法: 通过混合酶消化法进行胃癌原代培养进而建立细胞系。通过细胞形态学观察、细胞免疫组织化学染色、细胞倍增时间测定、核型分析、琼脂糖集落形成实验、平板克隆实验、免疫缺陷小鼠体内成瘤实验揭示其生物学特性。
　　 结果: 原代培养经纯化传代成功建立一个Ming氏膨胀型胃癌细胞系。显微镜下细胞呈上皮样，单层贴壁生长，有重叠生长现象。除处于有丝分裂阶段和衰老退变的细胞外，以梭形细胞、多边形细胞为主。细胞HE染色见胞浆轻度嗜碱，核大、明显，核仁清晰可见，核浆比例增大，可见多核巨细胞。细胞倍增时间(PDT)为60 h。软琼脂细胞集落形成率约为45.8％;平板克隆形成率约等于8.13％。细胞免疫组织化学染色显示:细胞Ⅳ型胶原表达阳性，胞浆内均匀染色;角蛋白染色呈强弱不同的阳性表达，胞浆均匀淡染;质子泵染色显示大部分胞浆及胞膜弥漫深染，呈强阳性表达;胞浆层粘连蛋白均匀深染，呈强阳性表达;Ki-67染色显示细胞核呈褐色，胞浆及胞膜未着色，200倍镜下随机取5个视野计数平均染色率约为80.6％; CEA染色显示胞浆内弥漫着色，染色较深，呈强阳性表达;波形蛋白染色见胞浆均匀着色，提示表达阳性;E-钙蛋白染色胞浆内染色较淡，呈弱阳性表达。细胞染色体众数介于23～137条之间。三倍体及亚三倍体细胞(46＜染色体数≤69)占86％，为稳定的亚三倍体细胞系。裸鼠异体接种全部成瘤。
　　 结论: 根据细胞系特征显示本细胞系是一新建的胃癌细胞系，将为以后的胃癌研究提供了一个很好的实验模型。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 胃癌标本

2．1．2 实验动物

2．1．3 主要仪器设备

2．1．4 主要试剂

2．1．5 常用液配制

2．2 实验方法

2．2．1 培养皿及器械的处理与准备

2．2．2 胃癌细胞原代培养

2．2．3 初始传代、纯化、冻存与复苏

2．3 Ming氏膨胀型胃癌细胞系的建立及其生物学特性

2．3．1 Ming氏膨胀型胃癌细胞系的建立

2．3．2 Ming氏膨胀型胃癌细胞系的生物学特性

2．4 数据处理与分析

第三章 结果

3．1 Ming氏膨胀型胃癌细胞系的建立

3．2 Ming氏膨胀型胃癌细胞系的生物学特性

3．2．1 细胞形态学

3．2．2 细胞生长曲线测定

3．2．3 细胞组织化学染色

3．2．4 软琼脂集落形成实验

3．2．5 平板细胞克隆形成实验

3．2．6 染色体分析

3．2．7 免疫缺陷小鼠体内成瘤实验

第四章 讨论

4．1 胃癌细胞系建立的价值

4．2 Ming氏膨胀型胃癌细胞系建立

4．3 细胞系生物学特性的鉴定

第五章 结论

参考文献

致谢

附录