JTB增进基因组的不稳定性及其表达蛋白的生物学功能和潜在临床价值

摘要

染色体不稳定性是大多数肿瘤细胞特别是实体瘤细胞和体外转化细胞的基本特征。其表现形式包括整条染色体的获得或缺失，杂合缺失，染色体易位重排，基因扩增等。目前认为染色体不稳定是肿瘤形成的始发因素，出现在肿瘤进展的早期阶段。体内外各种损伤刺激导致的基因组DNA链的断裂是染色体不稳定的根本原因。我们的研究发现，跳跃易位断裂点基因(JTB)在胃癌、肝癌中存在广泛的基因扩增和基因易位行为，而基因的扩增和易位是DNA双链断裂后异常修复的最终结果。JTB基因的断裂易位将导致其编码跨膜结构域的基因序列丢失，从而表达出潜在分泌型蛋白。我们利用染色体步移技术鉴定出JTB基因易位后产生的融合基因的转录表达。并对潜在分泌型蛋白的存在进行临床标本的验证。另一方面，我们也发现在胃癌、肝癌中JTB基因转录存在新的选择性剪接体，这种形式的剪接体将导致部分JTB转录本合成蛋白的提前终止。那么，无论是JTB基因易位还是选择性剪接体的存在最终将导致具有正常生物学功能的JTB蛋白失能。进一步探讨JTB蛋白失能后对细胞生物学功能的影响，我们发现JTB表达下调可以促进肿瘤细胞的迁移侵袭能力。研究结论表明在胃癌和肝癌中，JTB基因的易位和转录水平的异常剪接不仅可以导致JTB蛋白失能，更能增强肿瘤的转移能力。其基因易位后表达的异常分泌型蛋白也与肿瘤转移密切相关，并具备潜在的临床应用价值。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 DNA的损伤与修复

1．1．1 DNA的损伤类型及特点

1．1．2 DNA损伤修复方式及特点

1．1．3 DNA损伤与肿瘤

1．2 染色体脆性位点

1．2．1 染色体脆性位点的特征

1．2．2 染色体脆性位点与肿瘤

1．3 基因组的不稳定性与肿瘤

1．3．1 染色体不稳定性发生机制

1．3．2 染色体不稳定在肿瘤发生发展中的作用

1．4 选择性剪接体与肿瘤

1．4．1 选择性剪接机制

1．4．2 选择性剪接与肿瘤

1．5 上皮间质转化与肿瘤转移

1．5．1 肿瘤转移过程概述

1．5．2 上皮间质转化在肿瘤转移进程中的作用机制

1．6 跳跃易位断裂点蛋白(JTB)

1．6．1 JTB基因特点

1．6．2 JTB生物功能学研究

第二章 材料与方法

2．1 染色体步移法鉴定JTB融合基因

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 酶联免疫吸附试验检测血清JTB的含量

2．2．1 材料

2．2．1 方法

2．3 免疫组织化学法检测JTB蛋白表达及定位

2．3．1 材料

2．3．2 方法

2．4 相关稳转细胞系的构建

2．4．1 材料

2．4．2 方法

2．5 稳转细胞功能学研究

2．5．1 材料

2．5．2 方法

2．6 JTB参与细胞信号通路调控的研究

2．6．1 材料

2．6．2 方法

2．7 蛋白质间相互作用的研究

2．7．1 材料

2．7．2 方法

第三章 结果与分析

3．1 JTB基因扩增及断裂位点的验证

3．1．1 胃癌、肝癌组织中JTB基因扩增情况

3．1．2 胃癌、肝癌组织及细胞JTB基因断裂位点的鉴定

3．2 胃癌和肝癌组织中JTB基因新断裂位点的验证

3．3 JTB融合蛋白的验证

3．3．1 分泌型JTB融合蛋白的验证

3．3．2 分泌型JTB的检测及其与肿瘤相关性分析

3．3．3 新型检测装置的发明及其在肿瘤标志物检测中的应用前景

3．4 JTB选择性剪接体的鉴定及其与肿瘤相关性分析

3．4．1 JTB选择性剪接体的发现及验证

3．4．2 JTB选择性剪接体与肿瘤相关性分析

3．5 JTB蛋白生物学功能研究及其在肿瘤进展中的作用

3．5．1 JTB调控肿瘤迁移侵袭进程的作用与机制

3．5．2 JTB与HBsAg相互作用在肝癌进展中的潜在作用

3．6 谈论与展望

参考文献

英文缩略词表

致谢

在学期间发表论文及研究成果