CXCL9抗体联合FTY720延长大鼠再次心脏移植物生存期

摘要

目的：
　　趋化因子的基因表达上调和随之发生的T淋巴细胞在移植物中的募集发生在同种异体器官移植急性排斥反应和器官移植血管病变的早期。在本研究中我们尝试使用联合趋化因子CXCL9抗体和FTY720的免疫抑制方案，抑制记忆性T细胞的增殖，调节T细胞细胞因子的分泌，加速淋巴归巢，减少再次心脏移植物中的淋巴细胞浸润，从而延长大鼠再次心脏移植物的存活时间。
　　方法：
　　BN大鼠作为实验受体，LEW大鼠作为实验供体。颈部套管法异位心脏移植术后4周进行再次腹部异位心脏移植术。根据不同的免疫抑制方案将大鼠分为四组。对照组:再次心脏移植术后使用生理盐水处理。单用趋化因子CXCL9抗体组:再次心脏移植术后使用CXCL9抗体处理。单用FTY720组:再次心脏移植术后使用FTY720处理。联合组:再次心脏移植术后联合使用CXCL9抗体和FTY720处理。观察并记录各组中大鼠再次心脏移植物的生存期，进行组织病理学检测，测定各实验组中排斥相关细胞因子（IL-2，IL10，TGF-β，IFN-γ）的表达。
　　结果：
　　1.对照组移植物平均生存时间为4天;单用CXCL9抗体组为5.5天(n=6，P＜0.05);单用FTY720组5.5天(n=6，P＜0.05);联合组为16天(n=6， P＜0.001)。
　　2.对照组移植物排斥病理学评分为3.62±0.23;单用CXCL9抗体组为2.50±0.20(P＜0.05);单用FTY720组为2.62±0.23(P＜0.05);联合组为0.50±0.21(P＜0.001)。
　　3.移植物中促炎细胞因子的基因表达水平在联合组下降，而抑炎细胞因子的基因表达水平在联合组中升高。
　　4.受体外周血中促炎细胞因子的表达水平在联合组下降，而抑炎细胞因子的表达水平在联合组中升高。
　　5.体外混合淋巴细胞培养，单用CXCL9抗体或FTY720均可抑制T细胞增殖(P＜0.01);联合使用抑制效果更为明显(P＜0.001)。
　　结论：
　　1.单独使用趋化因子CXCL9抗体或FTY720可减少再次心脏移植物中炎性细胞的浸润，抑制T细胞增殖和调节T细胞细胞因子分泌，并延长再次心脏移植物的生存期。
　　2.联合使用趋化因子CXCL9抗体和FTY720比单独使用趋化因子CXCL9抗体或FTY720中的任意一种在抑制加速性免疫排斥反应的效果更为理想。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 器官移植现状

1．1．1 初次器官移植现状

1．1．2 再次器官移植现状

1．1．3 心脏移植现状

1．2 移植与免疫排斥

1．2．1 超急性排斥反应

1．2．2 急性排斥反应

1．2．3 慢性排斥反应

1．2．4 加速性排斥反应

1．3 记忆性T细胞与排斥反应

1．3．1 记忆性T细胞的产生及特性

1．3．2 记忆性T细胞的分型与分布

1．3．3 记忆性T细胞参与的再次移植免疫排斥反应

1．4 趋化因子CXCL9及其受体在器官移植中的研究进展

1．4．1 趋化因子的分类

1．4．2 CXCL9及其受体与移植排斥反应

1．5 移植排斥反应的药物治疗

1．6 FTY720作为免疫抑制剂的研究进展

1．6．1 FTY720的免疫抑制机理

1．6．2 FTY720在器官移植领域中的应用

1．7 实验目的与意义

第二章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要实验药品及试剂

2．1．3 主要实验仪器及耗材

2．2 实验方法

2．2．1 大鼠同种异体颈部套管法异位心脏移植模型

2．2．2 大鼠同种异体腹部缝合法异位心脏再次移植模型

2．2．3 实验药物治疗方案分组

2．3 检测指标

2．3．1 移植物生存期观察

2．3．2 组织病理学检查

2．3．3 RT-qPCR检测

2．3．4 ELISA检测

2．3．5 混合淋巴细胞反应

2．4 统计学分析

第三章 实验结果

3．1 CXCL9抗体和FTY720对再次移植物生存期的影响

3．2 移植物组织病理学检查

3．3 移植物中相关细胞因子基因表达水平

3．4 外周血相关细胞因子表达水平

3．5 混合淋巴细胞反应比较

第四章 讨论

第五章 展望

附录

参考文献

致谢

综述 心脏再次移植与加速性排斥反应