皱纹盘鲍与绿鲍杂交、回交后代的分子鉴定及性腺发育的初步研究

摘要

杂交育种是培育抗逆性强、生长速度快、存活率高的优良品种鲍的重要手段之一。本研究以皱纹盘鲍(DD)、绿鲍(FF)及其正反交子代为研究对象，开发了杂交种的分子鉴定方法。并以皱纹盘鲍(DD)、皱纹盘鲍和绿鲍的正交子代(DF)，回交子代(D-DF)为研究对象，从形态学、组织学和分子生物学层面，对其性腺发育的差异进行了初步研究。
　　1.对皱纹盘鲍和绿鲍的线粒体基因16S rRNA和COI部分序列进行遗传分析，结果显示16S rRNA基因比COI基因更为保守，并且具有明显的种间差异。筛选出具有种间差异的核基因VERL，利用16S rRNA及VERL基因设计引物，结合从皱纹盘鲍及绿鲍的微卫星引物中筛选出的引物afa142，建立了包括常规PCR和多重PCR的两步PCR法，成功鉴定出皱纹盘鲍、绿鲍及其正反交子代。
　　2.对DD、DF、D-DF三个群体的生长结情况进行分析，发现DF群体在生长速率及高温的适应性上明显优于亲本和回交群体。结合形态学和组织学对三个群体性腺发育进行比较分析，结果发现，以皱纹盘鲍群体的性腺发育情况为标准，卵子发生过程中，DF群体有少部分个体性腺呈不发育的状态，部分个体中出现大量不继续发育的卵原细胞，但是依然有可正常发育并排卵的个体;D-DF群体中，所有雌性个体性腺均能发育，仅有个别个的卵巢中出现DF群体中出现的不能继续发育的卵原细胞，但该个体中成熟的卵细胞仍可正常排放。精子发生过程中，DF群体的精子发生与DD群体相似，但在成熟的精巢中，不成熟的配子比例大于DD群体;D-DF群体中的雄性个体性腺发育则与DD群体没有明显差异。
　　3.克隆了皱纹盘鲍及绿鲍VASA基因的3'端全长，利用同源区域设计引物，以半定量PCR手段研究了DD、DF、D-DF三个群体性腺发育过程中VASA基因的表达量的变化。实验结果表明，在雌性性腺的发育过程中，VASA基因在三个群体中表达模式相似，在生长前期、生长后期逐渐升高，在成熟期达到最高，随着排放降低;其中，DD群体的VASA基因表达量最高，DF群体最低。在雄性性腺发育过程中，VASA基因在DD群体和DF群体中表达模式相似，在生长期升高，成熟期开始降低，排放期最低;而在D-DF群体中，VASA基因的表达量则从生长期开始随着性腺的发育逐步下降。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

第一节 鲍杂交育种的研究进展

1．1．1 国内外鲍杂交育种的研究进展

1．1．2 皱纹盘鲍和绿鲍杂交育种研究进展

第二节 遗传标记在鲍杂交育种中的研究进展

1．2．1 遗传标记在鲍杂交育种中的应用

1．2．2 DNA分子标记在鲍遗传育种中的应用

第三节 杂交育种中性腺发育的研究进展

1．3．1 性腺发育在水产养殖中的研究进展

1．3．2 性腺发育在贝类中的研究

第四节 VASA基因研究进展

1．4．1 VASA基因在原生殖细胞中的研究进展

1．4．2 VASA基因在配子发育中的研究进展

第五节 本文研究的目的、内容和意义

第二章 皱纹盘鲍与绿鲍种间杂交后代的分子鉴定

第一节 绿鲍、皱纹盘鲍及其杂交子代的线粒体16S rRNA和COI基因片段比较

2．1．1 材料和方法

2．1．2 结果

2．1．3 讨论

第二节 皱纹盘鲍、绿鲍及其正反交子代的分子鉴定

2．2．1 材料和方法

2．2．2 结果

2．2．3 讨论

第三章 皱纹盘鲍及其杂交、回交后代性腺发育的比较分析

3．1 材料和方法

3．1．1 实验动物

3．1．2 实验方法

3．2 结果

3．2．1 三个群体生长性状的分析

3．2．2 皱纹盘鲍(DD)群体性腺发育各时期特点

3．2．3 杂变子代(DF)群体性腺发育各时期特点

3．2．4 回交子代(D-DF)群体性腺发育各时期特点

3．2．5 三个群体性腺发育情况的比较

3．3 讨论

3．3．1 三个群体生长发育情况的比较分析

3．3．2 三个群体性腺发育的比较

3．3．3 三个群体性腺发育与生长的关系

第四章 VASA基因在皱纹盘鲍及其杂交、回交后代性腺发育过程中的表达

4．1 材料和方法

4．1．1 实验动物

4．1．2 主要实验仪器

4．1．3 实验方法

4．1．4 数据分析

4．2 结果

4．2．1 皱纹盘鲍、绿鲍VASA基因3’端全长

4．2．2 皱纹盘鲍群体(DD)性腺发育不同时期VASA基因的表达

4．2．3 杂交后代(DF)群体性腺发育不同时期VASA基因的表达

4．2．4 回交后代(D-DF)群体性腺发育不同时期VASA基因的表达

4．3 讨论

第五章 论文主要结论和创新点

5．1 结论

5．2 本研究的创新点

参考文献

致谢