橄榄油延缓人工绝经后骨质疏松症的疗效观察

摘要

随着妇科恶性肿瘤发病率的逐年上升及越趋年轻化，给社会和家庭带来了巨大的经济和精神负担。妇科恶性肿瘤主要以手术为主，并辅以放化疗。随着手术切除双侧卵巢及放化疗对卵巢损害的发生，将会导致雌激素急剧下降，从而增加骨质疏松症的发病率。目前激素替代疗法(hormone replacement therapy，HRT)广泛用于防治人工绝经后骨质疏松症，但是有临床大样本研究表明，HRT虽然能够减缓绝经后骨质疏松症的发生，但也增加了心血管疾病、乳腺癌、中风、糖尿病、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌等的发病率。因此寻找更加安全有效的防治妇科恶性肿瘤术后骨质疏松症的方案是目前的当务之急。有研究表明，橄榄油不仅可以减少骨量丢失，还具有抗炎、抗氧化、抗子宫内膜癌、乳腺癌、直肠癌、增强免疫力等作用。因此本文将对橄榄油是否能够延缓绝经后骨质疏松症的疗效进行观察。
　　目的:体内实验:探究橄榄油通过抗炎、抗氧化和调节骨保护素(OPG)及细胞核因子kB受体活化因子配基(RANKL)的表达对去势后SD(Sprague Dawley)大鼠骨丢失的延缓作用，并将其运用于临床探讨橄榄油的抗骨质流失和抗肿瘤的作用。体外实验:探讨橄榄油对离体成骨细胞增殖的影响。
　　方法:将120只清洁型、6月龄的雌性SD大鼠随机分成4组:①假手术组，n=30(Sham group，n=30);②去势组，n=30(OVX group，n=30);③去势+橄榄油组，n=30(OVX+Olive，n=30);④去势+雌激素组，n=30(OVX+E2，n=30);（③组和④组除了分别每天以5ml/100g橄榄油和25ug/kg E2灌胃，其他饮食起居与①组和②组保持一致，连续饲养12周。各组12周后，分别拉颈处死，并开胸左心室取血，检测血清中钙(Calcium，Ca2+)、磷(Phosphorus，P)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)、白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、丙二醛(Malonyldialdehyde，MDA)、硝酸盐成分、调节骨保护素(Osteoprotegerin，OPG)和细胞核因子kB受体活化因子配基(The receptor activator of nuclear factor kappa B ligand，RANKL)水平;运用双能X线测量各组腰椎及左侧胫骨的骨密度(Bone mineral density，BMD);将20例临床患者随机分成对照组(n=10)和实验组(n=10)，实验组给予每日早上规律性的口服橄榄油50ml，实验组和对照组其他饮食起居一致。服用橄榄油一年后，分别抽取实验组和对照组患者的静脉血，检测患者血清中肿瘤标志物CA1-25(carbohydrate antigen125)、CA19-9(carbohydrate antigen19-9)、AFP(α-fetoprotein)、CEA(carcino-embryonic antigen)、OPG、RANKL的水平，并运用双能X线检测实验组和对照组患者腰椎(L3、L4)及左侧胫骨骨密度的值。采用酶消化法原代培养新出生48小时内的SD大鼠颅骨的成骨细胞，运用NBT/BCIP试剂盒进行成骨细胞碱性磷酸酶染色鉴定;将成骨细胞以每孔5×103个培养于96孔板中，并将其分为空白组(Blank)、橄榄油组(Olive)、雌激素组(E2)，橄榄油组加入含200ul/ml橄榄油的培养基100ul，雌激素组加入含5μg/mlE2的培养基100ul，另设空白对照组（加入等量的完全培养基）。并采用CCK8检测橄榄油、E2不同作用时间对成骨细胞增殖的影响。
　　结果:动物实验结果:①与去势组相比，橄榄油和E2能显著地延缓去势SD大鼠的腰椎及左侧胫骨骨密度的降低，减缓骨质的流失，差异有统计学意义(P＜0.05)，然而，橄榄油组与E2组相比无明显的统计学差异(P＞0.05);与去势组相比较，橄榄油能够延缓去势SD大鼠左侧胫骨骨容量(BMC)和骨小梁体积比(BV/TV)的减少，差异有统计学意义(P＜0.05);②与去势组比较，橄榄油同时能够降低去势SD大鼠血清中P、ALP、IL-6、MDA、RANKL水平，使血清中OPG的水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，然而Ca2+水平变化不大;临床实验结果:①与对照组相比较，服用橄榄油的患者一年后腰椎(L3、L4)和左侧股骨颈骨密度下降较缓慢，差异有统计学意义(P＜0.05);②与对照相比，实验组血清中CA1-25，AFP和CEA水平显著下降，差异有统计学意义(P＜0.05)，然而CA19-9水平却无明显差异(P＞0.05)。③与对照组相比，服用橄榄油组中的OPG水平上调，RANKL水平下降，有统计学差异(P＜0.05);体外细胞实验:与空白对照组比较，橄榄油对成骨细胞具有增殖作用，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:从实验数据分析的结果看橄榄油可能是通过抗炎、抗氧化、上调血清中OPG及下调RANKL的表达来延缓骨质的流失，从而达到防治骨质疏松的作用，同时还能防止肿瘤标志物的升高，但其深层的作用机制有待于进一步的探究。

目录

声明

英汉缩略词表

摘要

第一章 前言

第二章 实验材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 实验分组和药物处理

2．4 药物处理后标本的采集

2．5 离体原代培养成骨细胞(OB)及鉴定

2．6 成骨细胞(OB)分组及药物处理

2．7 橄榄油对成骨细胞(OB)增殖的影响

2．8 橄榄油对成骨细胞(OB)OPG、RANKL细胞因子表达的影响

2．9 临床资料收集

2．10 T-Score

2．11 临床患者血清中AFP、CEA、CA1-25、CA19-9、OPG、RANKL的表达

2．12 运用双能X线检测临床患者腰椎及左侧胫骨的骨密度(BMD)

2．13 统计学分析

第三章 实验结果与分析

3．1 实验动物的一般资料分析

3．2 实验动物血清生化指标的变化

3．3 12周后各组SD大鼠腰椎及左侧胫骨骨密度(BMD)的变

3．4 12周后各组左侧胫骨骨容量(BMC)和骨小梁体积比(BV/TV)的变化

3．5 橄榄油对去势SD大鼠血清中OPG、RANKL水平的影响

3．6 服用橄榄油后临床患者腰椎(L3、L4、左侧胫骨)骨密度(BMD)及T-Score的变化(均数±标准差)

3．7 服用橄榄油后临床患者血清中肿瘤标志物及OPG、RANKL水平的变化(均数±标准差)

3．8 对数期成骨细胞

3．9 成骨细胞的鉴定

3．10 不同时间点橄榄油对成骨细胞(OB)增殖的影响

第四章 讨论与展望

4．1 讨论

4．2 结论

4．3 不足与展望

参考文献

致谢

附件