核受体Nur77和RXRα新型小分子调节剂的优化设计和活性研究

摘要

核受体是一类重要的转录因子超家族，参与了许多生理和病理过程的调控。本文主要针对核受体Nur77和RXRα的小分子调节剂进行活性筛选和功能研究。
　　第一部分主要研究靶向Nur77的双吲哚类化合物。Nur77是孤儿核受体的一员，目前尚未发现其内源性配体。但随着研究的不断深入，已有一些Nur77的体外配体被报道。有文献报道，双吲哚类化合物DIM-C-pPhCF3可以激活Nur77的转录活性和诱导细胞凋亡。因此，我们对DIM-C-pPhCF3的双吲哚环进行修饰，同时以形成磺酸盐的形式使其氧化，得到一系列全新的衍生物。在我们的研究中发现，氧化后的化合物相对于其氧化前对于癌细胞的增殖抑制大大增强，其中氧化得到的化合物XS-0170、0134、0135、0139能有效诱导细胞凋亡。Nur77在细胞核外与Bcl-2相互作用是其诱导凋亡的一条有效途径。我们发现这4个化合物能诱导Nur77出核及Nur77-LBD与Bcl-2共定位。另外，与许多靶向Nur77-Bcl-2通路诱导凋亡的化合物不同，这4个化合物并不诱导Nur77的表达量增加，而且能通过Nur77激活Nur77与RXRα异源二聚体的转录活性，其诱导细胞凋亡的效应还具有Nur77依赖性。其中，在双吲哚环上5位进行氟取代得到的化合物XS-0134相对于母核具有更高的靶向性。通过对这系列化合物的研究，为后续设计更加特异地结合Nur77的小分子调节剂奠定了基础。
　　第二部分是针对靶向RXRα辅助激活因子结合位点的拮抗剂的研究。近期我们课题组报道了化合物23结合于RXRα表面的辅助调节因子结合位点，开启了靶向RXRα表面结合位点的药物开发的先例。为进一步表征23的结合特性，我们采用了分子对接软件模拟23与RXRα的结合模式，其显示23香豆素环上的羟基以氢键与RXRα上453位的谷氨酸相互作用。为验证这一猜测，我们将这一羟基进行甲基化，结果表明甲基化后的化合物对于9-cis-RA诱导的转录激活作用明显减弱，说明这一羟基对于其结合的重要性，这一结论也在23的衍生物上得到确证。另外我们发现，化合物23的衍生物XS-0053，相对于23有更强的抑制RXRα激活的作用，而且能抑制TNFα激活的NF-κB信号通路，包括抑制IKK活化，IκBα降解和p65的入核。进一步研究表明XS-0053可以抑制tRXRα与TRAF2的相互作用，说明XS-0053抑制NF-κB信号通路是以通过RXRα实现的。这一部分的研究对于进一步开发结合于RXRα表面的调节剂具有重要意义。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．核受体概述

2．孤儿核受体Nur77

2．1 Nur77的促生存作用

2．2 Nur77的凋亡作用

2．3 Nur77与炎症

2．4 Nur77的结构特征和靶向Nur77的肿瘤治疗

3．双吲哚类化合物

4．RXRα

4．1 RXRα的结构及功能

4．2 RXRα的分子调节机制

4．3 针对RXRα的小分子调节

第二章 实验材料和方法

1．材料

1．1 细胞株、菌株和质粒

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2．方法

2．1 实验所需溶液配制方法

2．2 实验方法

第三章 靶向Nur77双吲哚类化合物的筛选和活性研究

1．实验结果

1．1 双吲哚化合物DIM-C-pPhCF3的衍生物结构

1．2 氧化后的双吲哚化合物能抑制细胞增殖

1．3 化含物XS-0170、XS-0134、XS-0135、XS-0139可以诱导细胞凋亡

1．4 这4个化合物能诱导Nur77出核及Nur77-LBD与Bcl-2共定位

1．5 XS-0170、XS-0134、XS-0135、XS-0139不诱导Nur77表达，而且可以激活Nur77和RXRα二聚体的转录活性

1．6 XS-0170、XS-0134、XS．0135、XS-0139诱导细胞凋亡具有Nur77依赖性

2．讨论

3．结论

第四章 结合于RXRα辅助激活因子结合位点拮抗剂的构效分析和活性研究

1．实验结果

1．1 化合物23结合模式的进一步表征

1．2 23香豆素环上的羟基与RXRα上453位谷氨酸以氢键形式结合

1．3 23衍生物的初步筛选

1．4 化合物XS-0053的活性研究

2．讨论

3．结论

参考文献

致谢