探讨白藜芦醇对小鼠卵母细胞排卵后老化的影响

摘要

大多数辅助生殖技术在体外操作，随着操作时间的延长，未受精的第二次减数分裂中期的卵母细胞会经历老化的过程，此过程限制了卵母细胞发展的潜力和受精的能力，因此如何延缓卵母细胞的老化为操作争取更多的时间是提高辅助生殖技术成功率的关键。然而，至今仍没有合适的方法能克服卵母细胞在体外发生的老化。本文的研究目的是探讨白藜芦醇是否可以改善排卵后老化的卵母细胞在体外发生的不良结局，之前有研究表明白藜芦醇可以提高不同物种在体外受精的概率。我们用小鼠第二次减数分裂中期的卵母细胞作为对照组，将其在M2的培养液中培养24h作为老化组，在含有2μM，10μM白藜芦醇的培养液中培养24h作为白藜芦醇组。老化组中出现低比率的原核形成和高比例的胚胎破碎。然而，白藜芦醇组中老化卵母细胞的发展潜力得到改善。与此同时，白藜芦醇缓解了由老化所引起的变形的纺锤体，异常的线粒体分布，高浓度的活性氧，凋亡的发生以及脂质过氧化。白藜芦醇提高了过氧化氢酶和去乙酰化酶1 mRNA的相对表达水平。我们的结果表明:白藜芦醇可以缓解小鼠卵母细胞在体外的排卵后老化，涉及的相关机制可能是通过上调老化细胞中去乙酰化酶1mRNA的相对表达水平保护线粒体功能而实现的。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 卵母细胞老化的概述

1．3 老化的卵母细胞中出现的主要变化及其影响

1．3．1 皮质颗粒

1．3．2 纺锤体

1．3．3 自由基

1．3．4 线粒体

1．3．5 钙离子的稳态

1．3．6 谷胱甘肽

1．4 Sirt1研究进展

1．5 白藜芦醇研究进展

1．6 本实验的目的与意义

第二章 材料与方法

2．1 实验动物

2．2 试剂与仪器

2．2．1 药品与试剂

2．2．2 主要仪器

2．3 实验方法

2．3．1 药物处理

2．3．2 小鼠卵母细胞的获取及体外老化的培养

2．3．3 卵母细胞孤雌激活

2．3．4 卵母细胞免疫荧光染色

2．3．5 卵母细胞线粒体分布的检测

2．3．6 卵母细胞活性氯的检测

2．3．7 卵母细胞凋亡的检测

2．3．8 卵母细胞脂质过氧化的检测

2．3．9 实时定量聚合酶链式反应

2．4 统计学分析

第三章 实验结果

3．1 白藜芦醇提高老化的卵母细胞在体外的激活率及早期的胚胎发育

3．2 白藜芦醇缓解老化的卵母细胞中畸形的纺锤体结构

3．3 白藜芦醇改善老化的卵母细胞中线粒体的分布和降低活性氧的水平

3．4 白藜芦醇延缓老化的卵母细胞凋亡的发生

3．5 白藜芦醇缓解老化的卵母细胞中的脂质过氧化

3．6 白藜芦醇对老化的卵母细胞中Cat和Sirt1 mRNA相对表达水平的影响

第四章 讨论

第五章 结论及展望

附录

参考文献

致谢