以孤儿核受体Nur77为靶标的抗肿瘤化合物筛选及其机理的初步探索

摘要

孤儿核受体Nur77，也称为TR3或NGFI-B等，是立早基因NR4A1的蛋白产物，它能被血清、生长因子和凋亡诱导剂等快速诱导表达。Nur77在细胞生存、增殖、分化和死亡等方面具有调控功能。Nur77在不同刺激因素下发挥不同的生物功能，与它的亚细胞定位、翻译后修饰等密切相关。首先，Nur77作为转录因子，在细胞核内可调控其他基因的表达;其次，Nur77在很多凋亡刺激下，可定位于细胞质，进而转运至线粒体，与Bcl-2相互作用，最终导致细胞色素C释放，凋亡发生。
　　核受体是药物分子靶点中非常重要的一大类;而随着Nur77在凋亡调控方面更深入的分子机制研究，表明它也是一个优良的潜在药物作用靶点。目前，已经发现多种化合物能够通过诱导Nur77表达或改变Nur77胞内定位来介导肿瘤细胞的凋亡。研究较多的化合物有佛波酯(TPA)、AHPN/CD437及其衍生物、二吲哚基甲烷衍生化合物等;此外，还有一些从中草药得到的化合物如紫草素及其衍生物等。已经应用于临床的抗肿瘤药物如依托泊甙(etoposide，VP-16)和6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine，6-MP)等，也被报道可通过Nur77介导凋亡。
　　鉴于目前大多数肿瘤都缺乏有效的治疗药物，且已有药物使用过程中逐渐出现的耐药问题，都使得开发结构新颖、高效、低毒副作用的肿瘤药物刻不容缓。为此，以Nur77为靶点筛选抗肿瘤活性化合物具有现实意义。本课题采用RT-PCR技术进行筛选，得到4个能明显上调Nur77转录水平的化合物;同时，通过WesternBlotting实验证明这些化合物也能上调Nur77蛋白表达水平。其中，编号为Ⅳ-10的化合物能显著诱导多种肿瘤细胞凋亡，并且通过RNA干扰实验证实这种凋亡作用依赖Nur77的表达;化合物Ⅳ-10诱导Nur77细胞质定位，可能通过启动线粒体凋亡途径而导致肿瘤细胞死亡。化合物Ⅳ-10促凋亡机制已有初步探索，更深入的机制研究可为其进一步开发应用提供基础。

目录

声明

摘要

英文缩略词

第一章 前言

1 核受体概述

2 孤儿核受体及Nur77

3 MAPK信号通路简介

4 MAPK信号通路与Nur77

5 肿瘤治疗药物的筛选

6 本课题研究背景及意义

第二章 材料与方法

1 实验材料

2 主要溶液及其配制方法

3 实验方法

第三章 实验结果

1 活性化合物筛选

2 以Nur77为靶点的筛选

3 化合物的生长抑制作用及促凋亡活性

4 化合物促凋亡作用与诱导Nur77表达的关系

5 化合物Ⅳ-10诱导Nur77表达及诱导肿瘤细胞凋亡

6 化合物Ⅳ-10诱导Nur77定位于线粒体

7 MAPK信号通路参与化合物Ⅳ-10对Nur77的诱导作用

8 化合物Ⅳ-10可在多种肿瘤细胞系中诱导凋亡

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢