一种从药用植物中快速筛选RXRα配体化合物的模型研究

摘要

维甲酸X受体α(RXRα)是研究抗癌药物的重要靶点之一，其配体Targretin已由FDA批准用于治疗皮肤癌，目前已知的天然RXRα小分子配体非常有限，因此建立一种新的活性筛选模型从中药及天然产物中快速发现以RXRα为活性靶点的新型小分子配体具有重要意义。
　　前期研究发现黄牛木属植物中的氧杂蒽酮类化合物能够抑制RXRα的转录活化功能，其中，CF-31能够直接与RXRα通过疏水性相互作用的方式结合，因此，本研究以黄牛木属植物黄牛木和红芽木为拟建立活性筛选体系的候选药材，对其60％乙醇水提取物经大孔树脂90％乙醇洗脱馏分（CCC和CFC）进行液质分析，以CF31含量为指标，最终选择黄牛木作为模型药材，对CCC馏分中的氧杂蒽酮类化合物进一步富集得到粗馏分CCC2，用于后续活性筛选，此外，对靶蛋白RXRα-LBD的诱导条件进行了优化，利用优化条件制备了RXRα-LBD蛋白样品，并综合运用BCA蛋白浓度测定法、考马斯亮蓝染色法、免疫印迹法、示差扫描量热法、等温滴定量热检测法对提取的蛋白进行检测和分析。
　　利用SPR技术研究发现CCC2与RXRα-LBD的结合解离模式是一种慢结合慢解离的模式，提示CCC2可应用于靶向亲和筛选体系，进而，利用靶向亲和-液质联用技术，基于配体化合物与靶受体特异性结合的原理，采用亲和超滤结合液质联用的方法筛选黄牛木粗馏分CCC2中可能与RXRα特异结合的活性成分，通过对比分析蛋白组及失活蛋白组的差异，初步筛选出5个可能与RXRα特异结合的活性成分，结合质谱数据，初步鉴定均为为简单的氧杂蒽酮类化合物，其是否与RXRα特异性结合，有待进一步确认。
　　本筛选模型可高效快速的发现药用植物中靶向RXRα的活性成分，可为抗肿瘤创新药物的研究提供重要依据。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 研究背景

1．1．1 基于靶向亲和原理的中药活性成分筛选方法

1．1．2 应用靶向亲和法从药用檀物中快速寻找RXRα配体的意义

1．1．3 黄牛木属植物黄牛木及红芽木研究的前期工作

1．2 立题依据

第二章 模型药材的选择

2．1 实验材料

2．1．1 实验药材与药品

2．1．2 实验仪置

2．1．3 实验材料和试剂

2．2 黄牛木和红芽木粗馏分的制备

2．3 黄牛木和红芽木粗馏分的液质分析

2．3．1 样品前处理方法

2．3．2 液质分析条件

2．3．3 结果分析

2．4 CCC中氧杂慧酮类成分进一步富集

2．5 CCC2的高效液相色谱分析和液质分析

2．5．1 样品前处理方法

2．5．2 高效液相色谱分析条件

2．5．3 液质分析条件

2．5．4 结果分析

第三章 RXRα-LBD蛋白提取与分析

3．1 实验材料

3．1．1 实验仪嚣

3．1．2 实验菌株

3．1．3 主要药品、试剂

3．1．4 主要溶液

3．1．5 抗体

3．2 RXRα-LBD蛋白诱导条件的优化

3．2．1 实验过程

3．2．2 实验结果

3．3 RXRα-LBD蛋白提取

3．4 RXRa-LBD蛋白浓度测定

3．4．1 实验过程

3．4．2 实验结果

3．5 RXRα-LBD的考马斯亮蓝染色法和免疫印迹分析

3．5．1 实验过程

3．5．2 实验结果

3．6 RXRα-LBD蛋白热确定性检测

3．7 RXRα-LBD蛋白活性测定

3．7．1 实验过程

3．7．2 实验结果

第四章 SPR技术分析

4．1 实验材料

4．1．1 实验仪嚣

4．1．2 实验芯片

4．1．3 实验药材

4．1．4 主要药品和溶液

4．2 实验过程

4．3 实验结果

第五章 亲和超滤-液质联用筛选RXRα小分子配体的研究

5．1 实验材料

5．1．1 实验仪置

5．1．2 实验药材与药品

5．2 液质分析条件

5．2．1 样品前处理方法

5．2．2 液质分析条件

5．3 实验过程

5．4 实验结果

5．5 小结

第六章 总结与讨论

参考文献

致谢