部分食品单核细胞增生性李斯特菌污染检测及其PFGE分型

摘要

目的：1.参加英国食品检验能力评价体系（FEPAS）活动，促进本实验室的管理水平和技术能力与国际接轨。2.检测部分食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染状况。3.采用PFGE分型方法为建立贵州单核细胞增生性李斯特菌PFGE数据库提供依据。
　　方法：1.参照 GB22429-2008《食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌 O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验》、SN/T1870-2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》、AOAC Official Method993.09.2000《李斯特属在乳制品，海产品和肉类中的DNA杂交探针检测法》、GB4789.30-2010《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》分别对FEPAS能力验证提供的二份盲样(M164d02A和M164d02B)运用酶联免疫荧光法、实时荧光定量PCR法、基因探针法和常规方法同时进行检测。2.食品单核细胞增生性李斯特菌污染调查分析的样品采集参照GB4789.1-2010《食品微生物学检验总则》进行，从我国部分省会城市（长沙市、贵阳市、成都市和重庆市）各选择两个抽样点，采集样本175份。另加贵州省出口辣椒制品120份，总计295份食品。其中辣椒制品229份、肉及肉制品37份、餐饮食品20份、动物性水产品6份、速冻食品3份。参照GB22429-2008对抽检样本行快速筛选，单核细胞增生性李斯特菌检测结果为阳性时，参照GB4789.30-2010进行单增李斯特菌分离鉴定确认，可疑菌株用API Listeria生化鉴定试剂盒及VITEK2 compact30全自动细菌鉴定分析系统进行鉴定，综合溶血试验的结果最终鉴定。3.对3株从食品中检出的单核细胞增生性李斯特菌(M164d02A、201105012、201106017)及3株单核细胞增生性李斯特菌（2010GZYJSZS、201109066、 ATCC-BAA-751）参照 PulseNet推荐方法对其进行PFGE分型。
　　结果：1.在单核细胞增生性李斯特菌PEPAS能力验证中四种检测方法结果一致，样本 M164d02A检出单核细胞增生性李斯特菌，样本 M164d02B未检出单核细胞增生性李斯特菌并获得FEPAS能力验证“Excellent identification”结果。2.在295份食品中，229份辣椒制品、37份肉及肉制品、20份餐饮食品均未检出单核细胞增生性李斯特菌，而在6份动物性水产品中检出1株单核细胞增生性李斯特菌,在3份速冻食品食品中检出1株单核细胞增生性李斯特菌。3.应用PFGE方法对6株单核细胞增生性李斯特菌进行分子PFGE分型，用Quantity one软件对图谱进行相似度分析，根据电泳产生条带的位置和数量的不同，共分为6个不同的型别，相似值在6.8％-73％。
　　结论：1.4种FEPAS能力验证的检测方法均有效检出单核细胞增生性李斯特菌，说明每一种方法都可有效获得 FEPAS能力验证。2.实验结果表明动物性水产品和速冻食品存在单核细胞增生性李斯特菌污染的风险。3.对6株单核细胞增生性李斯特菌应用PFGE方法进行PFGE分子分型及相似度分析发现，菌株之间表现出较大的遗传多样性。

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封面

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中文摘要

1 前言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

英文摘要

致谢

略缩词表

声明

附1综述： 单核细胞增生李斯特氏菌的现代分子生物学分型检测方法及研究进展

附2.试剂配制

附3.攻读医学硕士期间发表的论文目录