强直性脊柱炎患者Th1/Th2、Th17/Treg细胞网络的研究

摘要

目的：通过检测强直性脊柱炎（Ankylosing Spondylitis,AS）患者外周血(Peripheral Blood,PB)中辅助性细胞1(T helper cells1，Th1)、辅助性细胞2(T helper cells2，Th2)、辅助性细胞17(T helper cells17，Th17)和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)，检测血浆中细胞因子(cytokine,CK)IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10的含量，初步探讨 CD4+T淋巴细胞亚群（Th1、Th2、Th17、Treg细胞）及其细胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10）在AS发生发展中作用，以期为AS病情监测、预后判断提供新检测指标。
　　方法：应用流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)及细胞内因子染色技术(intracellular cytokine staining，ICS)检测78例AS患者（低活动性组n=44，高活动性组n=34）和30例健康体检者外周血中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞数量；酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血浆中IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10的水平，并分析它们与AS活动性的相关性。
　　结果：
　　1、流式细胞术检测AS患者外周血Th1、Th2、Th17和Treg细胞
　　外周血 Th1细胞百分率在 AS疾病组、低活动性组和高活动性组分别是15.86、14.18和17.75％，均高于健康对照组（12.05%），差异有统计学意义（P＜0.01）； AS低活动性组与高活动性组比较（P＜0.01），差异也有统计学意义。外周血Th2细胞百分率在AS疾病组和高活动性组均低于健康对照组，AS高活动性组低于低活动性组，差异均有统计学意义（P＜0.05），而 AS低活动性组与健康对照组比无明显差异（P＞0.05）。
　　外周血Th17细胞百分率，在AS疾病组、低活动性组和高活动性组分别是1.57、1.26和2.00%均增多，均高于健康对照组（0.82%），差异有统计学意义（P＜0.05）；AS低活动性组与高活动性组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。外周血 Treg细胞百分率，AS高活动性组低于健康对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)，而AS疾病组及低活动性组减少（P＞0.05）与健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；AS低活动性组与高活动性组比较有显著性差异。
　　2、AS患者外周血Th1/Th2、Th17/Treg细胞比率
　　Th1/Th2、Th17/Treg的细胞比率在AS疾病组、低活动性组、高活动性组与健康对照组比较均有增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；AS高活动性组与低活动性组比较，Th1/Th2、Th17/Treg的细胞比率也增高，差异也有统计学意义（P＜0.01）。
　　3、ELISA法检测AS患者血浆细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10水平
　　血浆细胞因子IFN-γ水平在AS疾病组、高活动性组分别是110.83、114.65 pg/ml，均高于健康对照组(102.20 pg/ml)比较增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；高活动性组与低活动性组比较升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；低活动性组与健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。血浆细胞因子IL-4水平，AS高活动性组与健康对照组、高活动性组与低活动性组比较均降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；而AS疾病组、低活动性组与健康对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　血浆细胞因子IL-17水平，AS高活动性组与健康对照组、AS高活动性组与低活动性组比较均增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；AS疾病组、低活动性组与健康对照组比较增高，差异无统计学意义（P＞0.05）。血浆细胞因子IL-10水平，在AS低活动性组与健康对照组比较降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；而AS高活动性组与低活动性组比较升高，差异也有统计学意义（P＜0.05）；AS疾病组、高活动性组与健康对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　4. AS患者外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞、血浆细胞因子及AS活动性的相关性分析
　　AS患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群与活动性相关性分析，Th1细胞、Th17细胞百分率、Th1/Th2、Th17/Treg比率与活动性（BASDI）呈正相关（r=0.809、0.409、0.652及0.459，P＜0.01）；Th2细胞与活动性呈负相关（r=-0.340，P＜0.01）；AS患者Treg细胞与活动性相关性呈负相关（r=-0.265，P＜0.05）。
　　AS患者血浆细胞因子与活动性相关性分析，IFN-γ、IL-17水平与活动性呈正相关（r=0.511及0.553，P＜0.01）；IL-4水平与活动性呈负相关（r=-0.402，P＜0.01）；IL-10与活动性无相关性（r=-0.621，P＞0.05）。
　　AS患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群与血浆细胞因子相关性分析，AS患者外周血中Th1细胞与IFN-γ、Th17细胞与IL-17呈正相关（r=0.620及r=0.495，P＜0.05）；Th2细胞与IL-4呈负相关(r=-0.420，P＜0.01)； Treg细胞和IL-10之间无相关性(r=0.060，P＞0.05)。
　　结论：
　　1、AS患者CD4+T淋巴细胞亚群功能异常，以及由此导致的细胞因子网络失衡及体内免疫功能紊乱参与了AS疾病的发生发展。
　　2、检测外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞数量及其血浆细胞因子水平，有助于判断病情、提示预后，有望成为AS病程监测的检测指标。

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中文摘要

1. 前 言

2.材料与方法

3.结 果

4.讨 论

5.结 论

参考文献

英文摘要

致谢

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附表.1 强直性脊柱炎患者标本信息收集表格

附表.2 强直性脊柱炎患者标本信息收集表格

附 综述:强直性脊柱炎与CD4+T细胞的研究进展