1型糖尿病小鼠胰岛细胞、淋巴细胞表达的改变及血清Ins、TNF-α、IL-10水平变化的研究

摘要

目的:研究1型糖尿病(type1diabetesmellitus,T1DM)小鼠胰岛B细胞、A细胞、白细胞介素-5(interleukin-5,IL-5)阳性细胞、CD3、CD57阳性细胞表达改变及血清中胰岛素(insulin,Ins)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)-α、IL-10水平的变化,为进一步探讨T1DM发病机制及为临床治疗提供依据。
　　方法:正常雄性C57BL/6J小鼠104只,随机分为3组:实验组、盐水对照组和正常对照组。1.模型建立:采用连续多次小剂量链脲佐菌素给药法(multiplelow-doseofstreptozotocin,MLDSTZ)。分别于注射后第3d、7d、10d、14d、21d及28d检测小鼠的空腹血糖、体重。2.取血清及胰腺组织,应用免疫组织化学SABC单染、邻片单染双标记、图像分析、形态计量法及酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)进行研究。
　　结果:1.与正常及盐水对照组比较,小鼠空腹血糖水平从实验14d组开始明显升高(P﹤0.01),以28d组最高;实验组小鼠的体重与对照组比较无显著性差异。2.实验组胰岛面积有所减小。胰岛B细胞在实验10d、14d、21d组染色加深,免疫反应强度增强,平均灰度值降低(P﹤0.01);B细胞的面数密度(NA)从第7d开始减小,呈逐渐下降趋势,与正常及盐水对照组比较有显著性差异(P﹤0.01)。3.胰岛A细胞在实验7d、21d、28d组免疫染色强度有所减弱,平均灰度值升高(P﹤0.05);7d以后细胞NA增大,与正常及盐水对照组比较有显著性差异(P﹤0.01);A细胞除分布于胰岛周边,也可见于胰岛中央。4.胰岛IL-5阳性细胞在实验3d、7d组免疫染色强度有所减弱,平均灰度值升高(P﹤0.01),其余时间点无明显变化。IL-5阳性细胞的NA及分布的变化与A细胞基本一致。经邻片单染双标法显示,胰岛中多数IL-5阳性细胞与A细胞位置相同。5.CD3阳性细胞散在分布于胰岛内,实验3d开始NA逐渐增大,以14d组最大,之后有所减小,除28d组外,均大于对照组,比较有显著性差异(P﹤0.01)。6.正常及盐水对照组CD57阳性细胞主要分布于胰岛周边,实验组CD57阳性细胞除分布于胰岛周边,还可见于胰岛中央。NA从实验3d开始增大,以14d组最大,之后有所减小,均高于对照组,比较有显著性差异(P﹤0.01)。7.ELISA法检测血清结果显示,与对照组相比,血清Ins浓度从实验7d后均处于较低水平;实验组血清TNF-α浓度处于下降趋势但均高于对照组,差异具有统计学意义(P﹤0.05);实验组IL-10浓度较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。
　　结论:1.成功制备T1DM小鼠模型。2.T1DM发生时,实验组胰岛面积有所减小,表达Ins的B细胞数量减少,合成和分泌Ins总量减少,Ins表达下调,血清Ins水平下降。3.胰岛A细胞和IL-5阳性细胞数量增多,变化趋势相似,IL-5定位于胰岛A细胞。胰高血糖素(glucagon,Glu)和IL-5同时表达上调参与了T1DM的过程。4.实验组CD3、CD57阳性细胞数量增多,变化趋势相似,提示T1DM初期,T淋巴细胞和NK细胞可能同时浸润胰岛,协同作用胰岛发生自身免疫反应,破坏胰岛B细胞,产生T1DM;随着胰岛B细胞进行性受损,数量减少,胰岛自身免疫反应相对减弱,淋巴细胞也相应减少。5.T1DM发生时,TNF-α浓度升高、IL-10浓度降低,提示Th1/Th2平衡失调,平衡向Th1方向漂移。

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中文摘要

前 言

材料与方法

1. 材料

2. 方法

第一部分T1DM小鼠模型的构建及胰岛B细胞形态与功能变化的研究

结果

讨论

第二部分T1DM小鼠胰岛A细胞、IL-5阳性细胞表达改变的研究

结果

讨论

第三部分T1DM小鼠胰岛CD3、CD57阳性细胞表达及血清TNF-α、IL-10水平改变的研究

结果

讨论

结 论

参考文献

英文摘要

致谢

缩略词表

声明

附：综述