银杏黄酮苷元对ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞凋亡及对P53、Bcl-2表达的影响

摘要

目的：探讨银杏黄酮苷元（Ginkgo flavone Aglycone，GA）对氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞凋亡及对P53、Bcl-2表达的影响及其可能机制。
　　方法：体外培养人主动脉内皮细胞（Human Aortic Endothelial Cells，HAECs），将细胞随机分为以下组别：（1）空白对照组：无血清高糖培养基（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium，DMEM）（2）150mg/L ox-LDL损伤组：150mg/L浓度ox-LDL与细胞共同培养24h；（3）NF-κB抑制剂组（Pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）：40μmol/L PDTC与细胞预先培养1h，然后加入150mg/L ox-LDL继续培养24h。（4）GA各浓度组：不同浓度GA（7.5、15、30、60mg/L）分别与细胞培养1h，而后加入150mg/L ox-LDL继续培养24h；采用倒置显微镜及荧光Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡的形态学变化；Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪（Flow cytometry，FCM）检测细胞凋亡率；实时荧光定量PCR检测内皮细胞凋亡相关基因 P53和Bcl-2 mRNA的表达；
　　结果：1. GA抑制ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞凋亡
　　(1)倒置相差显微镜下细胞形态学的变化：与空白对照组比较，ox-LDL损伤组的内皮细胞圆缩，细胞间隙增宽，有少量细胞脱落悬浮于培养液中；与ox-LDL损伤组比较，GA各浓度干预组细胞损伤减轻，皱缩细胞减少，细胞间隙变窄。
　　(2) Hoechst33258染色荧光显微镜下观察发现，与正常对照组相比，ox-LDL损伤组细胞出现大量的核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡细胞；与ox-LDL损伤组比较，GA预处理组随着浓度升高，人主动脉内皮细胞中细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数明显减少，大部分细胞染色质呈弥漫均匀的低强度荧光。
　　(3)流式细胞仪结果显示：与正常对照组相比，ox-LDL损伤组细胞凋亡率(24.75±0.40)％明显增加（P＜0.01），而不同浓度（7.5～60mg/L）GA干预处理组较ox-LDL损伤组细胞凋亡率明显降低，分别为(23.49±0.45)%，(22.35±0.30)%，(16.90±0.36)%，(13.66±0.41)%，NF-κB抑制剂预处理组细胞凋亡率(16.56±0.28)%较ox-LDL损伤组细胞凋亡率明显降低（P＜0.01），与30mg/L GA组之间的内皮细胞凋亡率比较无统计学差异（P>0.05）。
　　2. GA抑制 ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞凋亡相关基因表达
　　实时荧光定量PCR结果显示，与正常对照组相比，ox-LDL损伤组可显著升高人主动脉内皮细胞P53 mRNA表达，降低Bcl-2 mRNA表达（P<0.01）。与ox-LDL损伤组相比，不同浓度GA干预处理组，均可降低人主动脉内皮细胞P53 mRNA表达，升高Bcl-2 mRNA表达，且有一定浓度依赖性（P<0.01）。与不同浓度GA干预处理组相比，NF-κB抑制剂预处理组也可下调P53基因表达，上调Bcl-2基因表达（P<0.01）。
　　结论：GA对ox-LDL诱导HAECs凋亡具有剂量依赖性拮抗作用；GA和NF-κB抑制剂对ox-LDL诱导HAECs凋亡的抑制作用可能与其下调P53基因表达，上调Bcl-2基因表达有关。

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中文摘要

前言

第一节 材料和方法

第二节 实验结果

第三节 讨 论

第四节 结 论

参考文献

英文摘要

致谢

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文献综述: NF-κB与内皮细胞凋亡关系的研究进展