核因子Kb受体活化因子及其配体在糖尿病大鼠肾脏中的表达及氯化锂的防治作用

摘要

目的：1.通过检测糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织中RANK-RANKL表达来探讨其在DN发生发展过程中的意义。2.研究氯化锂对糖尿病肾病大鼠模型肾组织中RANK/RANKL表达水平的影响，探讨其治疗糖尿病肾病的可行性及相关机制。
　　方法：清洁级SD雄性大鼠24只，称重，随机分成3组：正常组(Z组)、模型组(M组)、治疗组(L组)，M组、L组大鼠予以大剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造1型糖尿病模型，Z组以等量柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液注射。以腹腔注射72小时后随机血糖值≥16.65mmol/L作为造模成功的判定标准。造模10周后以24小时尿蛋白定量≥30mg或超过Z组尿蛋白的10倍，作为糖尿病肾病成模的标准。对L组大鼠腹腔注射氯化锂15mg/kg，予Z组、M组大鼠等量生理盐水腹腔注射，观察用药后的相关指标。检测血糖、24小时尿微量白蛋白，留存大鼠肾组织标本，HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化，免疫组化观察并检测RANK/RANKL表达水平，实时定量PCR检测各组大鼠RANK mRNA的表达。
　　结果：
　　1.实验过程中，造模大鼠中1只未达到糖尿病模型标准，模型成功率为93.8％（15/16）。共死亡4只，死亡率16.7%。
　　2.一般指标观察：
　　体重：4周、10周时(造模后第4周、第10周末) M组、L组大鼠体重低于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)；12周时(治疗后第2周)，模型组M、治疗组L大鼠体重较正常组Z组大鼠明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组L大鼠体重高于模型组M，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　血糖：4周、10周及12周 M组、L组大鼠血糖均明显高于Z组，差异有统计学意义(P<0.05)；但M组、L组大鼠之间血糖无显著性差异(P>0.05)。
　　24小时尿微量白蛋白：4周时糖尿病肾病模型成功，M组、L组大鼠尿蛋白水平高于Z组，有显著性差异(P<0.05)；10周时，M组、L组大鼠尿蛋白水平明显高于Z组，有显著性差异(P<0.05)；M组、L组之间差异无显著性(P>0.05)。12周M组、L组大鼠尿蛋白水平高于Z组，有显著性差异(P<0.05)；L组尿蛋白水平低于M组，有显著性差异(P<0.05)。
　　3.组织病理学观察：M组大鼠肾组织表现为肾小球肥大，系膜基质增多，基底膜增厚，肾小动脉硬化；小管基底膜增厚，管腔狭窄、闭塞，间质水肿、纤维化等变化。L组大鼠毛细血管基底膜轻度增厚，系膜基质增多，但较M组有所减轻，肾小管水肿减轻，管腔狭窄程度较M组减轻。
　　4.免疫组化：Z组RANK-RANKL的少量表达，M组部分肾小球和肾小管中可见有RANK-RANKL明显表达，较同期Z组表达明显升高，有显著性差异(P<0.05)，L组RANK-RANKL的表达较M组下降，有显著性差异(P<0.05),但仍高于Z组。
　　5.实时定量PCR：M组、L组大鼠肾组织RANK mRA的表达明显高于Z组，差异有统计学意义(P<0.05)；L组大鼠肾组织RANK mRA的表达较M组下降，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：
　　1. RANK/RANKL在糖尿病肾病表达增加，RANK/RANKL可能参与糖尿病肾病的发生发展。
　　2.氯化锂可减少糖尿病肾病肾组织中RANK/RANKL的表达，对糖尿病肾病有一定的治疗作用。具体机制尚需进一步的研究。

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中文摘要

英文缩略语表

前言

材料与方法

1.实验材料

2 实验方法

结果

1.大鼠一般情况的观察

2. 各组大鼠血糖和体重的变化

3.各组大鼠24小时尿微量白蛋白比较

4. HE染色观察大鼠肾脏组织病理改变

5.大鼠肾组织中RANK、RANKL免疫组化阳性表达水平

6. 实时定量PCR检测RANKmRNA结果

讨论

1.糖尿病肾病实验动物模型的选择与评价

2.肾组织中RANK/RANKL的表达及其在糖尿病肾病发病机制中的意义

3.氯化锂在DN大鼠中对RANK/RANKL表达的影响

结论

参考文献

致谢

英文摘要

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