慢性氟中毒大鼠脑组织Nrf2/ARE信号转导通路改变

摘要

目的：观察慢性氟中毒大鼠脑组织中Nrf2/ARE信号转导通路中核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2）和胞质蛋白伴侣分子（kelch-like ECH-associated protein-1，Keap1）以及经该通路的主要抗氧化蛋白依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1（quinone oxidoreductase-1，NQO1）和血红素氧合酶1（heme Oxygenase-1，HO1）的表达改变，探讨它们在慢性氟中毒脑损伤机制中的作用，为地方性氟中毒的防治提供理论依据。
　　方法：SD大鼠90只，雌雄各半,随机分为3组，即正常对照组、染氟组（饮水氟含量50 mg/L,加入NaF）、维生素E（vitamin E，VE）拮抗组（饮水氟含量50 mg/L,同时给予维生素E5 mg/kg灌胃）；实验期为10个月。观察氟斑牙情况；用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟含量；用Morris水迷宫方法的定向航行实验检测大鼠学习能力，空间探索实验检测大鼠记忆能力；用蛋白印迹方法和免疫组织化学方法以及实时荧光定量PCR分别检测脑组织中Nrf2、Keap1、NQO1、HO1在蛋白和mRNA表达水平的变化；光镜下观察脑组织学结构；用生化方法测定超氧化物歧化酶（superoxide Dismutase，SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，实验结果作统计学分析。
　　结果：1.染氟组和VE组大鼠出现不同程度的氟斑牙，染氟组重于拮抗组。2.染氟组与VE组大鼠尿氟和骨氟含量均高于对照组，染氟组高于VE组。3.染氟组和维生素E拮抗组大鼠第五天逃避潜伏期较对照组显著延长（P均＜0.05），差异具有统计学意义。染氟组和维生素E拮抗组大鼠空间探索总次数较对照组显著减少（P均＜0.05），差异具有统计学意义。4.病理形态学检查显示，各组大鼠脑组织HE染色未见明显改变，尼式染色发现染氟组大鼠脑组织神经细胞中尼氏体数量较对照组明显减少。（5）蛋白印迹检测结果显示，染氟组大鼠脑组织中Nrf2、Keap1、NQO1、HO1蛋白表达均高于对照组，VE组表达亦高于对照组，但升高程度与染氟组相比明显减弱。（6）免疫组化结果显示，染氟组和VE组大鼠脑组织中Nrf2、Keap1、NQO1及HO1阳性表达较对照组升高，VE组升高程度不如染氟组，差异均有统计学意义（P<0.05）。（7）染氟组大鼠脑组织中Nrf2、Keap1、NQO1、HO1 mRNA表达均高于对照组（P均＜0.05），VE组表达上调程度亦不如染氟组。（8）染氟组大鼠脑组织中SOD水平明显低于对照组，MDA含量明显高于对照组，维生素E拮抗组大鼠脑组织的改变不如染氟组明显（P<0.05）。相关分析结果显示，染氟组大鼠脑组织中Nrf2及Keap1表达水平与MDA含量成正比，与SOD活性成反比；而染氟组大鼠脑组织中NQO1及HO1表达水平与SOD成正比，与MDA成反比。
　　结论：慢性氟中毒引起大鼠脑组织中Nrf2/ARE信号转导通路相关因子表达明显升高，与机体氧化应激状态的改变和调节有关，可能在慢性氟中毒性脑损伤发生机制有关；维生素E可拮抗高氟对脑组织的神经毒性作用。

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封面

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中文摘要

前言

材料与方法

1.材料

2.检测指标及方法

结果

3.1.大鼠慢性氟中毒表现

3.2．慢性氟中毒大鼠学习记忆能力的改变

3.3．Nrf2、Keap1、NQO1、HO1蛋白表达水平

3.4．大鼠脑组织Nrf2、Keap1、NQO1、HO1免疫组化结果

3 . 5 .氟中毒大鼠脑组织中Nrf2、Keap1、NQO1、HO1的 mRNA表达水平

3.6．病理形态学检查

3.7机体抗氧化系统中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的测定

3.8.染氟大鼠脑组织中SOD与Nrf2、Keap1、NQO1、HO1蛋白表达水平相关关系

3.9.染氟大鼠脑组织中MDA与Nrf2、Keap1、NQO1、HO1蛋白表达水平相关关系

讨论

结论

参考文献

英文摘要

致谢

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