肾上腺髓质素基因转染增强骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠心室重构及心功能的治疗作用

摘要

第一部分携带肾上腺髓质素基因的腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞细胞及其ADM的表达 目的：将带有Lac-Z基因和ADM基因的腺病毒载体，感染大鼠骨髓间充质干细胞，观察其感染率及ADM的表达。 方法：将构建好的Ad-ADM、Ad-LacZ进行体外扩增、噬斑法测定病毒滴度;贴壁法体外分离、扩增培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞；用x-gal染色检测腺病毒对MSCs感染率，ELISA和RT-PCR检测ADM在MSCs中的表达。 结果：大鼠MSCs传代后细胞逐渐呈均一的长梭样，放射状或栅栏样生长；病毒扩增后噬斑试验测定的滴度为Ad-LacZ的病毒滴度为2.6×109pfu/ml，Ad-ADM的病毒滴度为1.1×109 pfu/ml。腺病毒(Ad-LacZ)对MSCs的转染率与病毒感染复数(MOI)具有量效关系，MOI为150时细胞的感染率达95.4％；转染Ad-ADM后，MSCs可有效表达ADM，7d时达到表达高峰，与对照组相比明显增加(pg/ml:26.53±1.42 VS1.34±0.075，P<0.05)，15d后与对照组无差别(pg/ml:2.2±1.44 VS1.52±0.33，P>0.05)；RT-PCR支持这一结果。结论：①腺病毒对MSCs有较高的转染效率。②感染Ad-ADM后，MSCs可有效表达ADM。 第二部分转染肾上腺髓质素基因的骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗塞的治疗作用。 目的：研究转染肾上腺髓质素基因(Ad-ADM)的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠心肌梗塞治疗的作用。 方法：通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗塞模型；以DAPI标记细胞通过心肌局部注射移植MSCs并随机分组如下：注射无胎牛血清的L-DMEM(100μ1)为A组，作为对照组；注射单纯Ad-ADM腺病毒(100μ1)为B组；注射MSCs为(1×106个细胞，100μ1)C组：注射经Ad-ADM转染的MSCs(1×106个细胞，100μ1)为D组；4周后采用左心室插管和多普勒超声诊断仪检测大鼠的心功能；天狼猩红染色检测胶原含量，用偏振光显微镜分析Ⅰ/Ⅲ型胶原比率：荧光显微镜观察移植细胞在心脏存活及分布；免疫组化检测ADM在心肌梗死区的表达，Ⅷ免疫组化检测心梗区新生血管密度；Troponin I(TNI)、connexin43免疫组化检测移植细胞在心肌梗死区的分化及表达情况。 结果：与对照组及其它组相比，ADM基因修饰的MSCs组心肌梗死区ADM的表达增加；与对照组比较，单纯细胞移植组心梗区新生血管密度增高(P<0.05)，connexin43的表达增加(P<0.05)，梗塞区Ⅰ/Ⅲ型胶原比率降低(P<0.01)，并能改善心脏血流动力学功能及EF值；与单纯细胞组比较ADM基因修饰的MSCs移植组梗塞区新生血管密度增高(P<0.01)，connexin43的表达增加(P<0.05)，Ⅰ/Ⅲ型胶原比率降低更明显(P<0.05)，而心脏血流动力学功能及EF值改善更多；在各细胞移植组的心脏切片上均有DAPI标记的移植细胞的存活；各细胞移植组移植细胞均表达TNI。 结论：转染肾上腺髓质素基因(Ad-ADM)的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植能增强单纯MSCs移植对心肌梗塞大鼠的血管增生、降低梗塞区Ⅰ/Ⅲ型胶原比率和心功能改善作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩略词

声明

前言

第一部分 携带肾上腺髓质素基因的腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞的研究

材料

方法

结果

讨论

小结

第二部分 转染肾上腺髓质素基因的骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗塞的影响

材料

方法

结果

讨论

小结

结论

参考文献

综述 骨髓间充质干细胞与心肌修复

致谢

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