晚期糖化终产物通过p38MAPK、JNK、NF-κB途径促进T淋巴细胞分泌TNF-a

摘要

目的：研究表明晚期糖化终产物(AGEs)与糖尿病加速动脉粥样硬化(AS)形成有密切关系。研究发现AGEs可影响内皮细胞、单核巨噬细胞、平滑肌细胞表达炎症因子，使细胞功能紊乱，参与AS的形成。而AGEs对T细胞功能影响的研究较少，T细胞的激活与炎症因子的表达在AS的形成中起重要作用，本实验研究AGEs对人类T细胞白血病细胞株Jurkat细胞(CD4+T细胞)表达炎症因子TNF-a的影响及其信号机制，进一步了解糖尿病动脉粥样硬化形成的机制。
　　 方法：①常规方法制备AGEs，不同浓度AGEs与牛血清白蛋白(BSA)作用于PHA(0.25μg/ml)预刺激48h后的Jurkat细胞24h，MTT法检测AGEs对细胞生长的影响；②不同浓度AGEs与BSA作用于PHA(0.25μg/ml)预刺激48h后的Jurkat细胞24h，ELISA法检测AGEs与BSA对Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-a的影响；③适当浓度的AGEs(200μg/ml)作用于PHA(0.25μg/ml)预刺激48h后的Jurkat细胞0、10、20、30、40min，Western-blot检测AGEs对p38、JNK、Akt磷酸化及非磷酸化水平的影响。④Western-blot检测信号通路阻滞剂及N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对IκB磷酸化与非磷酸化水平的改变情况。⑤ELISA方法观察信号通路阻滞剂及NAC对AGEs刺激Jurkat细胞分泌TNF-a的影响。
　　 结果：①不同浓度AGEs与BSA作用于PHA预处理的Jurkat细胞24h后，MTT法检测结果显示各浓度AGEs与BSA对Jurkat细胞生长均无明显影响(p＞0.05)。②不同浓度AGEs与BSA作用于PHA预处理的Jurkat细胞24h后，ELISA法检测结果显示AGEs(100～400μg/ml)可促进Jurkat细胞上调炎症因子TNF-a表达(p＜0.01)。③200μg/ml的AGEs作用于预处理的Jurkat细胞0～40min后，Western-blot结果显示AGEs可上调p-p38、p-JNK表达，20～30min时作用明显，对p-Akt无明显影响。④200μg/ml的AGEs作用于预处理的Jurkat细胞30min可明显上调p-IκB表达，p38、JNK抑制剂和NAC能明显抑制AGEs上调p-IκB。⑤p38、JNK抑制剂和NAC能明显抑制AGEs上调炎症因子TNF-a。
　　 结论：AGEs可促进PHA预处理的Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-a，其机制与激活p38、JNK，上调p-IκB有关，与PI3K/Akt途径无关；NAC能够明显抑制AGEs引起的p-IκB及TNF-a上调，表明氧化应激也是其重要途径之一。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

前言

第一部分 AGEs对Jurkat细胞分泌TNF-a的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分 AGEs通过p38、JNK、NF-κB途径促进Jurkat细胞分泌TNF-a

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

综述：晚期糖化终产物受体在树突状细胞及T细胞免疫中的作用