人CD80-IgG1Fc融合蛋白的表达、鉴定及其诱导的抗肿瘤效应

摘要

目的：构建人CD80-IgG1Fc融合蛋白的真核表达载体，并转染CHO细胞，建立CHO融合蛋白稳定表达株；探讨经融合蛋白修饰的肝癌细胞H22对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响，及其对肝癌细胞H22皮下移植型荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。
　　 方法：通过RT-PCR从人外周血单个核细胞中扩增CD80膜外段及IgG1Fc基因，构建真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1（+），将其转染CHO细胞株并筛选。通过RT-PCR、Western blot及ELISA鉴定融合基因的表达；将融合蛋白修饰小鼠肝癌细胞株 H22，流式细胞术检测细胞膜上CD80的表达，以MTT比色法、乳酸脱氢酶释放试验检测经修饰的H22细胞对脾淋巴细胞增殖及其细胞毒性的影响。建立肝癌细胞H22皮下移植型荷瘤小鼠模型后，接种经融合蛋白修饰的H22细胞，观察其对肿瘤生长的影响。
　　 结果：成功构建了真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+)，并获得稳定表达CD80-IgG1Fc融合蛋白的重组CHO细胞株。针对融合蛋白修饰后的H22细胞， 脾淋巴细胞增殖较对照组增强，CTL的细胞毒活性增高。荷瘤小鼠接种经融合蛋白修饰的H22细胞后，皮下肿瘤体积在第12天小于对照组。
　　 结论：CD80-IgG1Fc融合蛋白能在CHO细胞中稳定表达；用CD80-IgG1Fc融合蛋白修饰的H22细胞能促进淋巴细胞活化，诱导特异性抗肿瘤免疫效应，并对体内肿瘤生长有抑制作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分 CD80-IgG1Fc融合蛋白的表达及鉴定

第二部分 融合蛋白修饰的H22细胞诱导淋巴细胞抗肿瘤免疫作用

第三部分 融合蛋白对肝癌细胞H22皮下移植型荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

结 论

参考文献

共刺激分子CD80在肿瘤免疫中的作用

致 谢