海马HCN通道在慢性内脏痛大鼠中枢敏化中的作用

摘要

目的：观察海马超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（HCN通道）对慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性的影响并探讨其作用机制，以期深入了解慢性功能性内脏痛的发病机制，从而为慢性内脏痛的药物治疗提供新的作用靶点。
　　方法：选用新生SD大鼠，出生后8～14d内，每天固定时间给予一次60mmHg压力的结直肠刺激（CI）建立慢性功能性内脏痛模型，对照大鼠除了不行CI外，其他情况均同模型大鼠。①测量大鼠腹外斜肌对结直肠扩张的放电反应以评估其肠道痛觉的敏感性；Westernblot方法观察比较 HCN1及HCN2通道蛋白在对照与模型大鼠海马的表达情况。②海马内微量注射不同浓度的 ZD7288（选择性 HCN通道阻断剂），观察其对模型大鼠内脏痛敏反应的影响；同时采用免疫组织化学法检测对照及模型大鼠海马CA1区HCN1及HCN2通道蛋白的表达及分布情况；并观察海马内连续三天给予高剂量的ZD7288后是否影响其表达。③采用离体脑片场电位的记录方法，观察慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP；并观察不同浓度的 ZD7288或尼氟酸（NFA）对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响。
　　结果：
　　1.慢性内脏痛模型大鼠的特点
　　①模型大鼠内脏痛敏反应显著高于对照大鼠。② Wester n b lo t结果显示，与正常大鼠比较，HCN1及HCN2通道蛋白在慢性内脏痛大鼠海马的表达均显著增加。
　　2. ZD7288对慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性的影响
　　海马内注射ZD7288可剂量依赖性显著降低慢性内脏痛大鼠内脏痛敏反应。
　　3.慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的变化
　　与正常大鼠相比较，慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的峰值及斜率均显著增加。
　　4. ZD7288对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响
　　与正常大鼠相比较，慢性内脏痛大鼠离体海马脑片灌流液中加入 ZD7288可剂量依赖性显著降低海马场电位 LTP的峰值及斜率。
　　5.尼氟酸对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响
　　与正常大鼠相比较，慢性内脏痛大鼠离体海马脑片灌流液中加入尼氟酸可剂量依赖性显著降低海马场电位 LTP的峰值及斜率。
　　6. HCN通道与慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性关系的形态学研究
　　观察 HC N通道蛋白在海马CA1区的表达，对照与模型大鼠均可见阳性细胞，其中主要在胞膜和胞浆上表达。图像分析结果表明，模型大鼠HCN1与HCN2通道蛋白在上述部位的表达较对照大鼠显著增强；且慢性内脏痛大鼠海马内给予高剂量ZD7288后HCN2通道蛋白表达明显降低。
　　结论：
　　1.海马HCN通道可能参与慢性内脏痛的中枢敏化，有望成为慢性内脏痛药物治疗的新靶点。
　　2.海马场电位LTP的易化可能参与慢性内脏痛的形成过程；而HCN通道可能参与慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的易化过程。

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前言

材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验动物

2.1.2主要药品和试剂

2.1.3 主要仪器与材料

2.2 方法

2.2.1 IBS慢性内脏痛模型的建立与评价

2.2.2 海马定位及微量注射

2.2.3 离体脑片海马场电位的记录方法[14]

2.2.4 We s te rn blot 分子生物学方法

2.2.5 免疫组织化学法

2.2.6 图像处理

2.2.7 统计分析

结果

3.1海马HCN通道与慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性关系的行为学研究

3.1.1 IBS慢性内脏痛模型大鼠的特点

3.1.2 ZD7288 对慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性的影响

3.2 海马HCN通道与慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性关系的突触可塑性研究

3.2.1 慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的变化

3.2.2 ZD7288对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响

3.2.3 尼氟酸对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响

3.3 海马HCN通道与慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性关系的形态学研究

3.3.1 HCN1、HCN2在大鼠大脑海马CA1 区的表达

3.4.2 ZD7288对慢性内脏痛大鼠海马CA1 区 HCN1、HCN2 表达的影响

讨论

4.1 慢性内脏痛模型的评价

4.2 海马HCN通道在慢性内脏痛中枢敏化中的作用

4.3 慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的增强

4.4 HCN通道在慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP中的作用。

结论

参考文献

致谢

HCN通道在突触可塑性及疼痛中的研究进展

参考文献