HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗体ELISA检测法的建立及初步应用

摘要

目的：
　　分别建立人冠状病毒NL63（Human Coronavirus NL63, HCoV-NL63）和人冠状病毒229E(Human Coronavirus229E, HCoV-229E）的血清酶联免疫吸附检测法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA），检测两种病毒血清IgG抗体，对其在福州地区儿童和青少年人群中的感染情况进行流行病学调查。
　　方法：
　　分别设计HCoV-NL63核衣壳蛋白基因3’端463bp、HCoV-229E核衣壳蛋白基因3’端514bp片段的引物。扩增这两个片段并将其克隆到p ET-22b(+)载体上，并转化到表达宿主大肠杆菌BL21，然后对克隆菌进行鉴定。通过诱导剂诱导蛋白表达，对表达的重组蛋白进行纯化、鉴定。以经过鉴定的纯化重组蛋白为抗原建立血清ELISA法。以此法检测收集到的442份0-20岁血清标本中两种病毒抗体，最后对结果进行比较分析。
　　结果：
　　1、442份血清样本中，HCoV-NL63抗体阳性277份(62.7％)。其中，≤6月婴儿阳性率50.6%（40/79）；>6～12月婴儿阳性率67.1%(19/28)；>1～5岁个体阳性率73.1%（125/171）；>5～10岁个体阳性率62.5%（55/88）；>10～20岁个体阳性率50%（38/76）。
　　2、HCoV-229E抗体阳性241份(54.5%)。其中，≤6月婴儿阳性率49.4%（39/79）；>6～12月婴儿阳性率64.3%（18/28）；>1～5岁个体阳性率70.8%（121/171）；>5～10岁个体阳性率48.9%（43/88）；>10～20岁个体阳性率26.3%（20/76）。
　　结论：
　　1、成功建立了HCoV-NL63和HCoV-229E血清抗体的ELISA检测法。
　　2、HCoV-NL63与HCoV-229E是福州地区儿童和青少年呼吸道感染的常见病原体，不同年龄段的阳性率可能有差异。
　　3、本研究结果为福州地区儿童和青少年呼吸道感染的防治提供了重要资料。所建立的检测方法具有进一步用于相关临床检测与研究的前景。

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声明

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缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

结果

一、片段F3’、A3 PCR产物电泳结果

二、片段F3’ 、A3 PCR产物测序

三、重组质粒的酶切鉴定

四、重组质粒测序鉴定

五、F3’、A3克隆菌小量表达产物经电泳和Western Blot鉴定

六、重组蛋白F3’、A3纯化

七、交叉ELISA

九、重复性试验结果

十、批量检测442份0-20岁人群血清样本中HCoV-NL63和HCoV-229E IgG抗体 ，不同年龄组两种病毒血清抗体阳性率统计结果和变化趋势分别如表7、图18-19示。

讨论

小结

参考文献

致谢

人冠状病毒NL63的研究进展

参考文献