水产品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA（ciELISA）检测法的建立及初步应用

摘要

本文分两部分，第一部分将磺胺二甲嘧啶(SM2)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)利用优化的重氮化法进行偶联，分别作为免疫原及包被原，免疫原注射免疫新西兰大白兔获得多抗血清。第二部分建立了快速检测水产品中残留磺胺二甲嘧啶的间接竞争ELISA方法，并通过对比实验，对检测过程中的各项条件进行优化。 研究方法和结果如下：用重氮化法将SM2与载体蛋白BSA偶联制备人工合成抗原SM2-BSA，以此作为免疫原，同法合成包被抗原SM2-HSA。选择常规免疫程序，免疫2～3月龄新西兰大白兔，获得多抗SM2抗血清，结果表明抗血清特异性针对SM2。用间接ELISA法测定抗血清效价，同时，利用ELISA方法对抗血清进行性质鉴定，分别以HSA、SM2-HSA、BSA及SM2-BSA进行包被，结果表明抗血清中存在抗SM2抗体，所获得的抗血清基本符合实验要求。 用所制备的抗血清建立了间接竞争ELISA检测SM2方法。利用对比实验，优化ELISA工作条件，方阵滴定法确定理想SM2-HSA包被抗原的浓度为1.0μg/ml，酶标二抗(羊抗兔IgG-HRP)工作浓度为1：1000以及多抗(SM2-PcAb)血清的工作浓度为1：3200。以上述实验条件为基础，以系列稀释的SM2标准溶液作为检测对象，绘制标准曲线，拟和的线性回归直线方程为y=88.323-18.013x，相关系数R2=0.9964，从标准曲线可以得知，此方法可测定的最适范围为10～200μg/L，最小检测限约为1.89μg/L。本实验所建立的ELISA方法的精确度以批内误差(孔间差异)和批间误差(板间差异)表示，结果表明孔间差异和板间平均差异分别为2.56％和5.14％，这表明方法精确度较好。添加回收率实验测得凡纳滨对虾肌肉样本和牙鲆肌肉均回收率为90.98％±3.32％和90.02％±2.68％在可测定浓度范围内，磺胺二甲嘧啶(SM2)抗血清与磺胺甲噁唑、氯霉素、红霉素、恩诺沙星、甲氧苄啶、呋喃唑酮等可能会因同时使用而导致共同残留的抗微生物药物未显示免疫交叉反应性，与结构相似物磺胺嘧啶的交叉反应率为11.0％。这表明所建立的方法有较高特异性和选择性，适合磺胺二甲嘧啶药物残留样本的快速检测。

目录

缩略语一览表

第一章研究综述

1水产品中残留药物概述

2水产品中药物残留检测方法概述

3酶联免疫检测法的研究进展

4酶联免疫吸附法检测药物残留国内外研究现状

5磺胺类药物残留检测研究现状

第二章磺胺二甲嘧啶抗血清制备

1.材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2.结果

2.1人工抗原的合成及鉴定

2.2抗血清质量鉴定

3.讨论

第三章磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立及初步应用

1.材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2.实验结果

2.1间接竞争ELISA反应条件优化

2.2实际样品检测

3.讨论

参考文献

附录

致谢