微囊藻毒素LR雌性性腺毒性及对雌孕激素分泌的影响

摘要

目的：
　　通过体内和体外模型，观察MC-LR雌性性腺毒性及对雌孕激素分泌的影响，为MC-LR的生殖毒性作用及机制研究提供新的线索和实验依据。
　　方法：
　　1.体内染毒实验：成年健康雌性清洁级昆明种小鼠48只（经筛选后小鼠动情周期相对规律的），按体重随机分为4组，每组12只，染毒剂量分别为0、3.75、7.5和15μg/kg。每天按体重腹腔注射MC-LR一次，连续染毒16天。实验结束，于小鼠动情间期处死，观察指标包括体重、动情周期、子宫和卵巢及肝肾脏器系数、子宫和卵巢组织病理、血清激素水平、卵巢组织Star、P450scc和P450arommRNA表达。
　　2.体外染毒实验：无菌条件下分离提取21日龄雌性昆明种小鼠卵巢颗粒细胞，以0、5、10、20μg/ml MC-LR染毒卵巢颗粒细胞，分别检测染毒24h、48h、72h细胞增殖情况和细胞培养液中雌二醇（E2）和孕酮（P）含量；以0、5、10、20μg/ml MC-LR染毒小鼠卵巢颗粒细胞48h，并设CAT+20μg/ml MC-LR干预组和CAT对照组，测定细胞内ROS含量及卵巢颗粒细胞StAR、P450scc和P450arommRNA的表达
　　结果：
　　体内染毒实验结果
　　1.染毒结束，最高剂量组体重低于对照组（P<0.05)；7.5和15μg/kg剂量组子宫和卵巢脏器系数低于对照组（P<0.05)，而肝脏脏器系数高于对照组（P<0.05)；15μg/kg剂量组肾脏脏器系数高于对照组（P<0.05)。
　　2.7.5μg/kg剂量组动情期延长，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05)；15μg/kg剂量组与对照组比较动情间期延长并伴有动情周期的延长（P<0.05)。
　　3.卵巢组织学观察：3.75和15μg/kg剂量组闭锁卵泡数目与对照组比较呈现上升趋势（P<0.05)，而成熟卵泡数目与对照组比较呈下降趋势（P<0.05)；3.75μg/kg剂量组与对照组比较初始卵泡数目下降(P<0.05)，黄体数目上升（P<0.05)；7.5ug/kg剂量组可见较多生长卵泡（P<0.05）。
　　4.血清孕酮水平随着剂量的上升呈下降趋势；雌二醇呈上升的趋势，其中15μg/kg剂量组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05)；各剂量组血清FSH和LH未能检测出。
　　5.与对照组比较，15μg/kg剂量组StarmRNA表达下调（P<0.05)，7.5和15μg/kg剂量组P450sccmRNA表达下调（P<0.05)，各剂量组P450arommRNA表达无差异。
　　体外染毒实验结果
　　1.MC-LR染毒24 h，20μg/mL剂量组颗粒细胞的增殖活性高于对照组（P<0.05)；而染毒48和72 h，20μg/mL剂量组低于对照组（P<0.05)。
　　2.MC-LR染毒24 h，低、高剂量组卵巢颗粒细胞雌二醇的分泌量与对照组比较升高（P<0.05)；染毒48h，各剂量组雌二醇分泌无差异；染毒72 h，各染毒组雌二醇的分泌量均明显低于对照组（P<0.05）。
　　3.MC-LR染毒24h和72h各染毒组卵巢颗粒细胞孕酮分泌量均低于对照组（P<0.05），染毒48h各染毒组分泌量呈现上升的趋势，5μg/ml明显高于对照组（P<0.05）。
　　4.MC-LR染毒48h，高剂量组小鼠卵巢颗粒细胞内ROS含量与对照组比较上升（P<0.05），CAT可抑制颗粒细胞内ROS生成。
　　5.MC-LR染毒48h，小鼠卵巢颗粒细胞StarmRNA表达上调，P450scc表达下调。与对照组比较，10、20μg/ml组Star和P450scc mRNA表达量差异有统计学意义（P<0.05）；P450arommRNA仅10μg/ml组表达下调，与对照组比较（P<0.05）。CAT干预对MC-LR所致Star、P450scc、P450arommRNA表达改变未见明显影响。
　　结论：
　　MC-LR存在小鼠雌性性腺毒性并影响雌孕激素分泌，MC-LR可能通过影响雌孕激素合成过程中关键酶Star、P450scc和P450arom mRNA的表达进而干扰雌孕激素的合成。

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英汉缩略词对照表

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英文摘要

1、前言

2、材料和方法

2.1主要试剂及器材

2.2 主要溶液的配制

2.3 实验动物与饲养

2.4研究设计和实验方法

2.5 数据处理及统计学分析：采用SPSS 13.0进行统计分析。各指标数据经过正

3、结果

3.1 体内染毒实验结果

3.2 体外染毒实验结果

4、讨论

4.1 MC-LR所致雌性小鼠性腺毒性

4.2 MC-LR对雌性小鼠动情周期的影响

4.3 MC-LR对雌性小鼠性激素分泌及相关合成酶的影响

5、结论

参考文献

致谢

综述