不同来源体细胞诱导形成多能性干细胞(iPS)的比较研究

摘要

目的：
　　通过对不同来源体细胞进行多能性干细胞（iPS）诱导，计数其类克隆数、计算类克隆率，比较并分析其诱导效率差异，旨在寻找一种能以较高效率诱导iPS的途径，为再生医学研究提供更好的技术平台。
　　方法：
　　1.原代分离、培养骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchyma l Stem Cell，BMMSC）、脂肪干细胞（Adipose-Derived Stem Cell，ADSC）、胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblast，MEF）及鼠尾成纤维细胞（Mouse Tail Fibroblast，MTF），获得稳定传代的细胞；
　　2.扩增培养含有3种转录因子质粒的大肠杆菌DH5α，进行质粒大提，将质粒转染至Plat-E包装细胞内，合成病毒；收集、浓缩病毒液，分装，-80℃超低温冰箱保存，备用；
　　3.将4种细胞分别铺种于同一6孔板的4个孔内，并用浓缩病毒感染各体细胞，培养过夜后，全量换液；每2-3天换液一次，观察细胞状态及是否出现类克隆，计数类克隆。
　　结果：
　　1.分别获得BMMSC、ADSC、MEF、MTF类似细胞系；
　　2.类克隆率结果为，BMMSC2.55±0.25/万，ADSC2.78±0.38/万，MEF1.18±0.22/万，MTF1.38±0.22/万。
　　结论：
　　1.初步建立了骨髓间充质干细胞（BMMSC）的制备技术，获得类似BMMSC细胞系；
　　2.初步建立了脂肪干细胞（ADSC）的制备技术，获得类似ADSC细胞系；
　　3.成功建立鼠尾成纤维细胞（MTF）的制备技术，获得MTF细胞系；
　　4.初步建立了诱导性多能干细胞（iPSC）的诱导技术；
　　5.在iPSC诱导效率方面，BMMSC与ADSC可能优于MEF与MTF，似乎具有更易于被诱导的趋势。

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英文缩略词表

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前言

材料与方法

一、 主要仪器设备

二、 主要试剂及配制

三、 实验方法

结果

1. 骨髓间充质干细胞（BMM SC）的制备

2. 脂肪干细胞（ADSC）的制备

3. 鼠尾成纤维细胞（ MTF）的制备

4. 病毒的制备

5. 诱导体细胞形成诱导性多能干细胞（iPSC）并计数类克隆

讨论

1. BMMSC与ADSC的原代分离与培养

2. MEF与MTF的原代分离与培养

3. 病毒的制备

4. 诱导体细胞形成诱导性多能干细胞（iPSC）并计数类克隆

5. 研究的局限性

结论

参考文献

致谢

综述

参考文献