2种不同诱导方法体外诱导人多潜能干细胞分化成大脑基底内侧神经节隆起区神经前体细胞的差异

摘要

目的:比较单层贴壁培养法和拟胚体(EB)悬浮培养法诱导人多潜能干细胞分化为大脑基底内侧神经节隆起区(MGE)神经前体细胞分化的效率,并探讨不同浓度的SHH通路激动剂SAG对分化为MGE神经前体细胞纯度的影响,为细胞移植治疗探索优化的分化方案.方法:分别采用单层贴壁诱导法和EB悬浮法诱导人多潜能干细胞分化为神经上皮细胞,通过加入不同浓度的SAG使其腹侧化,最终诱导成表达NKX2.1的MGE前体细胞并进行计数.比较2种不同的分化方案和不同浓度的SAG对MGE神经前体细胞纯度的影响.结果:在单层贴壁诱导法中,当SAG浓度为0μM、0.1μM、0.5μM、1μM、2μM和3μM时,NKX2.1阳性细胞率分别为0％、(48.3±11.5)％、(78.6±2.7)％、(77.6±4.0)％、(69.0±7.5)％和(67.7±7.9)％;SAG浓度为0.5μM和1μM时诱导分化获得的MGE神经前体细胞纯度显著高于其他浓度组(P<0.001或0.05).当SAG浓度为0.5μM时,在EB悬浮培养法中NKX2.1的阳性细胞率为(74.8±6.5)％,与单层贴壁诱导法差异无统计学意义(P>0.05).采用单层贴壁诱导法时,神经球和神经元出现的时间点均要早于采用EB悬浮培养法.结论:采用单层贴壁诱导法,0.5μM的SAG可能是人多潜能干细胞分化培养为MGE神经前体细胞的更优化方案.