南瓜蛋白对人胰腺癌细胞增殖抑制作用及对细胞EGFR的影响

摘要

目的：研究南瓜蛋白(cucurmosin，CUS)对人胰腺癌(Pancreatic Cancer，PC)细胞株的增殖抑制作用和对细胞重要分子EGFR的影响，以及CUS联合吉非替尼（Gefitinib，GEF）对胰腺癌细胞株的作用；探讨CUS对人胰腺癌细胞的影响及其机制，为CUS可能的抗胰腺癌临床应用提供理论基础和实验依据。
　　方法：1.采用SRB法测定CUS单用及其与GEF联用对体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞的增殖抑制作用。
　　2.集落形成实验测定CUS单用及其与GEF联用对体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞集落形成的影响。
　　3.Western-blot技术检测CUS单用以及与GEF联用对体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞EGFR的影响,CUS对细胞EGFR下游通路蛋白表达的影响。
　　4. RT-PCR技术检测CUS作用于体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞对EGFR mRNA的影响。
　　结果：1.SRB法结果显示，CUS对体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞具有显著的增殖抑制作用，并呈明显的剂量依赖性和时间依赖性。CUS对PANC-1细胞作用24h、48h和72h的IC50分别为(12.50±0.012)μmol/L、(0.2678±0.020)μmol/L和(0.0677±0.018)μmol/L；CUS对BxPC-3细胞作用24h、48h和72h的IC50分别为(7.88±0.035)μmol/L、(0.7638±0.026)μmol/L和(0.2935±0.023)μmol/L。
　　2.集落形成实验表明随着随着浓度的增加CUS对人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞集落形成抑制率逐渐增加，呈明显剂量依赖性。当CUS浓度为0.025μmol/L时对PANC-1细胞集落形成抑制率为92.37％；当CUS浓度为0.05μmol/L时对BxPC-3细胞集落形成抑制率为82.39%。
　　3.不同浓度CUS分别作用于人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞72h后对上述细胞EGFR蛋白表达的水平均有下调作用，呈剂量依赖性，而对EGFR mRNA的表达水平均无明显影响；CUS亦可下调EGFR下游Ras/Raf通路及PI3K/Akt通路蛋白的表达水平。
　　4. CUS联合GEF作用人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞与各自药物单用相比具有以下结果：①联合用药组对细胞的增殖抑制率大于各自药物单用组，q>0.85；②联合用药组可明显下调细胞EGFR蛋白表达，q>1.15。③联合用药组的集落形成抑制率大于各自药物单用组，q＞1.15；
　　结论：1.CUS对体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞具有明显的增殖抑制作用，呈时间依赖性和剂量依赖性。
　　2.CUS可明显下调体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞EGFR蛋白的表达水平，但对EGFR mRNA水平上却未见明显影响，提示CUS仅通过干扰蛋白翻译的阶段而发挥作用；并且CUS也可抑制细胞EGFR下游Ras/Raf通路及PI3K/Akt通路蛋白的表达。
　　3.CUS与GEF联用对体外培养的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞的增殖抑制呈协同作用。

目录

封面

声明

目录

英文缩略词表（English acronyms table）

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分南瓜蛋白对人胰腺癌细胞的增殖抑制作用

一、 材料和方法

1 材料

2 实验方法

二、 结果

1 SRB法测定CUS对人胰腺癌细胞增殖抑制的影响

2 集落形成实验检测CUS对人胰腺癌细胞的增殖抑制作用

三、讨论

第二部分南瓜蛋白对人胰腺癌细胞EGFR的影响

一、材料和方法

1 材料

2. 实验方法

二 结果

1 Western blot 检测CUS对人胰腺癌细胞EGFR及其下游PI3K/Akt,Ras/Raf信号通路的影响

2 RT-PCR检测CUS对人胰腺癌细胞EGFR mRNA表达水平的影响

三、讨论

第三部分南瓜蛋白联合吉非替尼对人胰腺癌细胞的影响

一、 材料和方法

1 材料

2 方法

二、结 果

1 SRB法测定CUS与GEF联合应用对人胰腺癌细胞增殖抑制的影响

2 集落形成实验检测CUS与GEF联合应用对人胰腺癌细胞的增殖抑制作用

3 Western-blot 检测CUS联用GEF对人胰腺癌细胞EGFR蛋白表达水平的影响

三、 讨论

四、结论：

参考文献

附有关溶液的配制

致谢

表皮生长因子受体在胰腺癌治疗中的进展