大鼠牙胚根端条件培养基对人牙周膜干细胞向成牙骨质样细胞分化的作用

摘要

牙骨质是覆盖在牙根表面的一层硬结缔组织,是建立牙周膜与牙根之间附着的重要结构。炎症情况或异常机械刺激下会引起牙骨质的破坏,甚至导致不可逆性牙根吸收。牙齿发育完成以后,成牙骨质细胞来源有限。牙周膜干细胞作为一类具有自我更新和多向分化特性的早期未分化细胞,是成牙骨质细胞来源的理想选择。研究表明,microRNAs在干细胞的自我更新和分化中发挥重要的调控作用。本实验利用大鼠牙胚根端条件培养基,诱导人牙周膜干细胞向成牙骨质样细胞分化,以期为后续研究牙周膜干细胞向成牙骨质细胞分化过程中microRNAs的调控作用提供研究基础。
　　实验目的:研究大鼠牙胚根端条件培养基对人牙周膜干细胞向成牙骨质样细胞分化的作用。
　　实验方法:免疫磁珠法分选出STRO-1阳性的牙周膜干细胞,利用克隆形成效率实验及免疫细胞化学染色对分选后的细胞进行鉴定。制作牙胚根端条件培养基诱导牙周膜干细胞分化。对诱导后的细胞进行形态学观察、Alizerin Red Solution染色、免疫细胞化学染色、ALP活性检测以及Real-timePCR检测。
　　实验结果:克隆形成效率分析显示牙周膜干细胞呈克隆式生长;免疫细胞化学结果显示,免疫磁珠分选的阳性细胞均能表达间充质干细胞标志物STRO-1和血管周围细胞标志物CD146;所有细胞Vimentin蛋白表达阳性而Cytokeratin蛋白表达阴性。Alizerin Red Solution染色显示,诱导组细胞表面出现大量矿化结节;免疫细胞化学染色结果显示,诱导后的细胞能够表达成牙骨质细胞标志物牙骨质蛋白-1和牙骨质粘附蛋白;碱性磷酸酶活性检测显示,诱导后的细胞碱性磷酸酶活性较对照组有显著升高。Real-timePCR检测显示诱导后的细胞成牙骨质细胞相关的碱性磷酸酶基因和骨涎蛋白基因表达量显著增加。
　　结论:牙胚根端条件培养基能良好地诱导牙周膜干细胞向成牙骨质样细胞的分化。

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前言

实验一 人牙周膜干细胞的分离、纯化及鉴定

1 引言

2材料和方法

2.1实验材料

3实验结果

3.1牙周膜细胞形态学观察

3.2 免疫磁珠分选结果

3.3 克隆形成效率分析结果

3.4免疫细胞化学染色结果

3.5 冻存与复苏结果

4讨论

实验二 诱导人牙周膜干细胞向成牙骨质样细胞分化的研究

1 引言

2 材料和方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3统计学方法

3.实验结果

3.1大鼠牙胚根端细胞的培养

3.2诱导的形态学观察

3.3 矿化染色结果

3.4 免疫细胞化学染色结果

3.5 ALP活性检测结果

3.6 Real-time PCR结果

4 讨论

4.1 APTG-CM为PDLSCs分化提供特殊的微环境

4.2 APTG-CM促进PDLSCs向成牙骨质样细胞分化

4.3 成牙骨质样细胞与成骨细胞的区分

4.4 成牙骨质细胞与其前体细胞之间的关系

4.5 实验不足之处

结论

参考文献

致谢

microRNAs对牙周膜干细胞增殖和分化的调控作用