鼻咽癌患者外周血类循环肿瘤干细胞的检测与临床相关性分析

摘要

目的:检测鼻咽癌患者治疗前后外周血中的类循环肿瘤干细胞含量,并分析其与患者临床分期、疗效及预后的相关性,进一步探讨与肿瘤复发、转移的关系。
　　方法:对健康志愿者及我院鼻咽癌首诊患者(治疗前后)抽取外周血10ml,提取外周血中单个核细胞之后应用抗CD45单克隆抗体、抗Epcam单克隆抗体、抗CK单克隆抗体、抗CD44单克隆抗体以及抗CD133单克隆抗体对样本进行抗体标记,以CD45-/Epcam+/CK+的细胞作为患者的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC),以CD45-/Epcam+/CD44+或者CD45-/Epcam+/CD133+的细胞作为患者的类循环肿瘤干细胞(like-circulating tumor stem cells,L-CTSC),应用流式细胞仪检测CTC以及L-CTSC的数量,并分析其治疗前后与患者临床分期的相关性。
　　结果:1.10例健康志愿者当中,只有1例检测到CTC;L-CTSC未在健康人群中检测到。
　　2.在鼻咽癌患者当中治疗前CTC的检出率为72％(36/50例),CD45-/Epcam+/CD44+的检出率为68%(34/50例),CD45-/Epcam+/CD133+的检出率为40%(20/50例);治疗后CTC的检出率降为60%(30/50例),CD45-/Epcam+/CD44+降为58%(29/50例),CD45-/Epcam+/CD133+降为30%(15/50例)。
　　3.鼻咽癌患者治疗前:N0-1分期中,CTC<5个的占90.9%(20/22例),≥5个的占9.1%(2/22例);在N2-3分期中,CTC<5个与≥5个的患者各占半数(14/28例),分布差异有统计学意义(P=0.002)。N0-1分期中,检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者占82.1%(23/28例),而没有检测到的只占17.9%(5/28例)。在N2-3分期中,检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者与没有检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者各有50%(11/22例);差异具有统计学意义(P=0.016)。表明CTC及CD45-/Epcam+/CD44+细胞的数量与N分期成正相关。
　　4.鼻咽癌患者治疗后:在T1-2分期中,CTC<5个的患者占92.0%(23/25例),≥5个的患者占8%(2/25例);T3-4分期中,CTC<5个的占56%(14/25例),≥5个的占44%(11/25例),且差异有统计学意义(P=0.004)。在N0-1分期中,CTC<5个的患者占95.5%(21/22例),≥5个的患者占4.5%(1/22例);N2-3分期中,CTC<5个的占57.1%(16/28例),≥5个的占42.9%(12/28例),且差异有统计学意义(P=0.002)。在T1-2分期中,检测到CD45-/Epcam+/CD44+的患者占72.0%(18/25例),没有检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者占28.0%(7/25例);T3-4分期中,检测到CD45-/Epcam+/CD44+的患者占44.0%(11/25例),没有检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者占56.0%(14/25例);差异有统计学意义(P=0.045)。在N0-1分期中,检测到CD45-/Epcam+/CD44+的患者占81.8%(18/28例),没有检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者占18.2%(4/28例);在N2-3分期中,检测到CD45-/Epcam+/CD44+的患者占39.3%(11/28例),没有检测到CD45-/Epcam+/CD44+细胞的患者占60.7%(17/28例);且差异有统计学意义(P=0.002)。
　　5.治疗前后患者三种细胞的数量都有出增多、减少与不变三种情况,其中减少的最常见,但各项分布与患者临床指标之间无相关性。
　　结论:1.鼻咽癌患者外周血中存在循环肿瘤细胞及类循环肿瘤干细胞,运用流式细胞仪即可对其进行检测与分析。
　　2.治疗前患者的CTC及CD45-/Epcam+/CD44+细胞水平仅与N分期具有相关性。
　　3.治疗后患者的CTC及CD45-/Epcam+/CD44+细胞水平与T、N分期都相关。
　　4.CD133作为鼻咽癌的干细胞标记物,在患者的外周血中可以检测到,但其检出率在治疗前后均低于CD45-/Epcam+/CD44+细胞,且与各项临床指标不具有相关性。

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前 言

材料与方法

1.材 料

2.方 法

结果

1.流式细胞仪检测散点图

2.各种细胞的检出率

3.治疗前患者各种细胞的检出情况

4.治疗后三种细胞的检出情况

5.治疗前后患者三种细胞的变化趋势

讨论

结论

参考文献

基 金 资 助

致谢