循环肿瘤细胞(CTC)及循环肿瘤干细胞(CTSC)的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析

摘要

目的：通过检测结直肠肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTC）以及循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cells,CTSC)，分析其数目与患者临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤远端转移等的相关性，验证它们作为患者预后评判指标的可行性，初步探讨CTC及CTSC与肿瘤转移的相关性。
　　方法：本论文入组首诊初治结直肠癌患者50人，在其手术治疗前，以及治疗后一周各抽取外周血15ml，利用Ficoll淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞后，平均分成两份：CTC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CK、CTSC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CD44、CD133，并利用超高速流式细胞分选仪MOFLO XDP进行CTC及CTSC的检测分析。
　　结果：判定CD45-/EpCAM+/CK+细胞为CTC，CD45-/EpC AM+/CD44+细胞为CTSC1，CD45-/EpCAM+/CD133+细胞为 CTSC2，CD45-/EpCAM+/CD44+/CD133+细胞为CTSC3。判定手术前（手术后）检测出CTC≥2个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTC<2则为阴性；CTSC1≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则CTSC1<1为阴性；CTSC2≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则CTSC2<1为阴性；CTSC3≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTSC3<1为阴性。结果显示：（1）结直肠癌患者手术前 CTC阳性检出率为34％，CTSC1阳性检出率为44%,CTSC2检出率为4%；手术后CTC阳性检出率为38%，CTSC1阳性检出率为54%，CTSC2阳性检出率为6%，均较术前增高但并不具有统计学意义；手术前后的样本均未检测出CD44、CD133双阳的细胞，CTSC3阳性检出率为0%。（2）手术前CTC与肿瘤的大小、T分期（浸润深度）有关（P均小于0.05），与患者年龄、性别、TNM分期、N分期及M分期都不具有显著相关性；而手术后CTC则与肿瘤的T分期、N分期（淋巴结转移）、M分期（远处转移）均具有显著相关性（P均小于0.05），与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期不具有显著相关性。（3）手术前CTSC1与肿瘤的T分期有关（P<0.05），与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、N分期及M分期都不具有显著相关性；而手术后CTSC1则与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、T分期、M分期及N分期均无显著相关性（P>0.05）。（4）综合术前、术后CTC、CTSC1的指标与肿瘤的TNM分期和M分期具有显著相关性(P<0.05)，与N分期也有一定的相关性（P=0.063）。
　　结论：（1）CTC与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关。（2）CTSC1与肿瘤的浸润深度具有相关性。CD44作为结直肠癌CTSC的检测指标优于CD133。（3）CTSC的检测可能是CTC检测的有益补充。

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前言

材料和方法

一、主要实验对象与材料

二、实验方法与步骤

三、流式细胞仪检测结果判读

四、入组病人资料

五、统计学处理

结果

一、流式细胞仪的敏感性和特异性

2. 检出率

3. CTC/CTSC与结直肠癌TNM分期的相关性分析

4. CTC与CTSC1联合应用

讨论

一、CTC在结直肠癌中的临床应用价值

二、CTSC在结直肠癌中的临床应用价值

三、外科手术对CTC和CTSC检测结果的影响

四、CTC与CTS C联合应用的临床意义

五、CTC与CTS C在结直肠癌中的研究展望

结论

参考文献

致谢

综述

参考文献