生活方式因素、NOD2免疫炎症通路相关基因多态性及相应miRNA与肺癌关系的流行病学研究

摘要

目的
　　探讨生活方式因素、NOD2免疫炎症通路相关基因单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系,为采取有效的肺癌防治措施提供科学依据;研究miR-107在肺癌组织中的表达及其临床意义,评价其对肺癌的预防、诊断和治疗价值。
　　方法
　　1.采用病例对照研究设计,收集确诊的肺癌新发病例1312例和按频数匹配的健康对照1556例。采用统一编制的调查表,面访收集研究对象的一般人口学特征、居住环境、饮食史、吸烟史、饮酒史、饮茶史、疾病及家族史等资料。综合应用非条件Logistic回归模型、分层分析、叉生分析和交互作用分析等多种方法,重点评估吸烟、饮酒、饮茶与肺癌发病风险的调整比值比(OR)及其95％可信区间(95%CI),并进行因素间交互作用分析。
　　2.应用分子流行病学方法,每位病例采集5ml血液样本,每位对照用Oragene唾液收集器收集唾液样本,抽提基因组DNA。筛选NOD2免疫炎症通路相关基因多态性位点,用MultiplexSNaPshot技术检测多态性位点的基因型。采用非条件Logistic回归模型调整可能混杂因素,分析基因多态性与肺癌的关系,并进行基因-环境交互作用分析。
　　3.采用实时荧光定量PCR法检测43例原发性肺癌患者肺癌组织及其相应癌旁正常肺组织中miR-107的表达,分析其表达量与各临床病理因素之间的关系。
　　结果
　　1.与不吸烟者相比,既往吸烟和目前吸烟都显著增加男性患肺癌的危险性,调整OR值分别为4.763(95%CI:3.539~6.411)和4.472(95%CI:3.456~5.786);随着开始吸烟年龄的提前、吸烟年限的延长、每日吸烟量、吸烟包-年和烟雾吸入深度的增加,男性患肺癌的危险性增大,均呈剂量反应关系(Ptrend<0.001)。以目前吸烟者做参照,戒烟≥10年患肺癌的危险性下降了32%(OR=0.681,95%CI:0.484~0.956)。吸烟均使男性患肺腺癌和肺鳞癌的危险性增加,调整OR值分别为2.910(95%CI:2.144~3.952)和7.502(95%CI:4.848~11.609)。
　　2.调整年龄、性别、吸烟史和吸烟包-年等因素后,未发现饮酒、每周饮酒次数、开始饮酒年龄与肺癌有统计学关联。联合作用分析显示,与不吸烟且不饮酒者相比,吸烟且饮酒者患肺癌的危险性(OR=4.666,95%CI:3.552~6.129)高于吸烟但不饮酒者的危险性(OR=4.108,95%CI:3.140~5.374)。
　　3.与不饮茶者相比,饮茶者发生肺癌的危险性显著降低,调整OR值为0.655(95%CI:0.547~0.785)。绿茶、红茶、乌龙茶、其他类型茶的调整OR值分别为0.747(95%CI:0.590~0.945)、0.578(95%CI:0.411~0.813)、0.749(95%CI:0.581~0.965)和0.439(95%CI:0.318~0.608)。按吸烟史分层分析,结果显示饮茶者可显著降低非吸烟者肺癌的发病风险,调整0R值为0.452(95%CI:0.347~0.588);且随着饮茶年限的增加,肺癌发生的危险性降低;每周饮茶次数、每月饮茶量、饮茶浓度及饮茶类型对非吸烟者肺癌均有保护作用。在吸烟者中,每周饮茶<3次、每月饮茶量<250g和饮淡茶者与肺癌有显著关联,调整OR值分别是0.452(95%CI:0.290~0.706)、0.548(95%CI:0.366~0.819)和0.631(95%CI:0.428~0.932)。
　　4.对NOD2免疫炎症通路上基因NOD2、RIPK、NF-КBIA和IL8的研究显示:携带NOD2rs3135500GA/AA突变基因型可显著增加肺部疾病者患肺癌的风险(OR=2.309,95%CI:1.205~4.421);携带RIPK2rs16900627GA/AA突变基因型可降低男性(OR=0.788,95%CI:0.673~0.923)、吸烟者(OR=0.764,95%CI:0.639~0.914)以及饮酒者(OR=0.679,95%CI:0.535~0.863)患肺癌的风险;携带RIPK1rs17548629CT/TT突变基因型可降低不饮茶者(OR=0.752,95%CI:0.586~0.964)和肺部疾病者OR=0.464,95%CI:0.253~0.850)患肺癌的风险;携带IL8rs1126647AT/TT基因型可降低饮茶者患肺癌的风险(OR=0.751,95%CI:0.579~0.976)。本研究未发现RIPK1rs77736895位点以及NF-КBrs2273650位点C/T的改变与肺癌发病风险存在显著关联。
　　5.与癌旁正常肺组织相比,miR-107在肺癌组织中表达上调,差异有统计学意义(P=0.01)。miR-107表达水平与年龄、性别、TNM分期、肿瘤大小、有无吸烟史和有无肿瘤家族史无关(P>0.05),而与淋巴结转移有关(P=0.026)。
　　结论
　　1.进一步证实了吸烟是男性肺癌的主要危险因素,戒烟能降低肺癌的危险。
　　2.饮酒可能不是肺癌的危险因素,但可能与吸烟有协同致癌作用。
　　3.饮茶是肺癌的保护因素,尤其可明显降低非吸烟者肺癌的危险性。
　　4.NOD2免疫炎症通路相关基因多态性与中国人群肺癌的遗传易感性有关,但这些结果需要其他研究加以证实,并开展功能学研究以揭示其潜在的生物学机制。
　　5.miR-107在肺癌组织中表达上调,其表达量可能与肺癌患者淋巴结转移有关。miR-107有可能成为评估肺癌恶性程度的一种新型标志物。

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第一部分 生活方式因素与肺癌发病风险的病例对照研究

1 前言

2 研究对象与方法

2.1 研究对象

2.2 研究方法

2.3 统计分析方法

3 结果

3.1 研究对象的一般情况

3.2 生活方式因素与肺癌的关系

4 讨论

4.1 吸烟

4.2 饮酒

4.3 饮茶

4.4 研究的优势与不足

第二部分 NOD2炎症信号通路相关基因多态性与肺癌易感性的研究

1前言

2材料与方法

2.1研究对象

2.2主要仪器和试剂

2.3 基因位点选择

2.4 实验方法

2.5实验质量控制

2.6 统计分析方法

3结果

3.1 研究对象的一般特征

3.2 各SNP位点检测结果

3.3 免疫炎症基因多态性与肺癌遗传易感性的关系

3.4 分层分析

4讨论

第三部分 miR-107在肺癌组织中的表达及其临床意义

1前言

2 材料与方法

2.1 标本收集

2.2主要试剂

2.3 主要仪器

2.4实验方法

2.5 统计分析方法

3 结果

3.1 荧光定量PCR的结果

3.2 miR-107 在肺癌组织中表达水平上调

3.3 miR-107表达水平与临床病理特征的关系

4讨论

结论

参考文献

致谢

DNA甲基化调控的miRNA与肿瘤相关性的研究进展