重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤cAMP/PKA信号传导通路的影响

摘要

本研究共包括两大部分,每部分都通过建立SAP大鼠模型进行研究。第一部分探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制。第二部分采用重组纤维连接蛋白(fibronection,FN)肝素结合域多肽进行治疗,观察其对重症急性胰腺炎肺损伤的治疗效果、研究其可能的机制,为临床寻找如何阻止SAP患者肺损伤的方法提供实验依据。
　　第一部分：环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路在重症急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用
　　目的:探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制。
　　方法:健康雄性SD大鼠56只,按完全随机法分为假手术(SO)组、重症急性胰腺炎组(SAP组)、SAP+H89(cAMP抑制剂)组,后两组按取材时间不同又分为6、12及24h三个亚组,共7组,每组8只。采用酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、IL-1β,同时观察胰腺和肺组织的病理变化,免疫组织化学蛋白方法检测cAMP依赖PKA催化亚基C(PKAC)和磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白(p-VASP),荧光定量聚合酶链反应检测肺组织VSAPmRNA表达水平。
　　结果:与S0组比较,SAP组各时间点血清TNF-α、IL-1β明显上升(P<0.05),胰腺、肺病理学改变明显,肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VASPmRNA表达水平明显增强(P<0.05),12h达高峰。TNF-α(266.07±17.14)pg/mL、IL-1β(169.17±25.92)pg/mL、PKAC(210.69±6.32)×103、p-VASP(56.62±0.57)×103、VASPmRNA(2.06±0.21),且与TNF-α、IL-1β之间存在明显的正相关性。与SAP组比较,SAP+H89组各时间点胰腺、肺病理学改变明显减轻,肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VSAPmRNA表达水平明显下降(P<0.05)。
　　结论:提示cAMP/PKA信号传导通路的活化参与了重症急性胰腺炎肺损伤的病理过程,可能与TNF-α及IL-1β水平上调及VASP磷酸化而发挥作用。
　　第二部分：重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤治疗作用的研究
　　目的:观察重组纤维连接蛋白(fibronection,FN)肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤的干预效果及其可能机制。
　　方法:将健康雄性SD大鼠56只按完全随机法分为假手术(SO)组、重症急性胰腺炎组(SAP组)、重组FN肝素结合域多肽治疗组(重组FN组),后两组按取材时间不同又分为6、12及24h三个亚组,共7组,每组8只。检测血清淀粉酶(AMY,amylase),HE染色观察肺组织病理,酶联免疫吸附法检测血清TNF-α及FN,免疫组化对肺组织磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白(phosphorylated vasodilator-stimulated phosphoprotein,p-VASP)定位,Western Blotting检测肺组织的p-VASP蛋白及PKAC蛋白变化。
　　结果:与SO组比较,SAP组各时间点血清AMY、TNF-α水平、p-VASP蛋白及PKAC蛋白均显著上调(P<0.05),血清FN明显减少(P<0.05),肺组织病理明显加重;与SAP组比较,重组FN组各时间点血清AMY、TNF-α水平、p-VASP蛋白及PKAC蛋白均显著下调(P<0.05),血清FN明显增加(P<0.05),肺组织病理明显改善。
　　结论:重组FN肝素结合域多肽可一定程度上改善重症急性胰腺炎相关肺损伤,可能通过降低血浆型FN消耗程度、改变TNF-a水平及抑制cAMP/PKA信号传导通路而减轻肺组织毛细血管渗漏起作用。

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前言

参考文献

第一部分环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路在重症急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用

材料与方法

（一） 实验材料

（二） 实验方法

结果

1、腹水量的变化

2、血清淀粉酶变化

3、各组大鼠胰腺组织病理学改变

4、各组大鼠肺组织病理学改变

5、大鼠血清TNF-α和IL-1β检测结果

6、肺组织PKA C亚基免疫蛋白测定

7、p-VASP蛋白及mRNA在肺组织表达情况

8、相关分析

讨论

参 考 文 献

第二部分重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤治疗作用的研究

材料和方法

㈠ 实验材料

㈡ 实验方法

结果

1、血清AMY、TNF-α、FN水平变化

2、肺组织病理形态学变化

3、肺组织p-VASP蛋白免疫组化、western-blotting测定结果见表2

4、肺组织PKA C蛋白western-blotting测定结果见表3

讨论

参考文献

结论

致谢

综述