半乳凝素-1与肝癌转移的相关性研究

摘要

目的：1.分析临床切除的原发性肝癌标本中Gal-1的表达，并统计其与临床相关指标的相关性；2.构建Gal-1低表达的干扰质粒，验证其干扰效果，为之后的细胞系的构建奠定基础；3.在构建成功低表达或过表达Gal-1的真核质粒后，选取Gal-1表达水平较高的的肝癌细胞系进行Gal-1低表达肝癌细胞构建及选取Gal-1表达水平低的肝癌细胞系进行Gal-1过表达肝癌细胞株构建，为之后分析Gal-1在肝癌细胞中的生物学作用奠定基础；4.在构建成功的肝癌细胞系中，分析其对肝癌的迁移、侵袭等影响，并初步探索其机制。
　　方法：1.提取62例原发性肝癌临床标本，运用western blot技术分析Gal-1在这些临床临床样本中的表达，通过灰度值分析软件分析Gal-1的灰度值，并分成高低两组，收集整理相应的临床资料，再通过相应的统计方法分析肝癌中Gal-1与相关临床数据的意义；2.通过文献查找相关的Gal-1干扰序列，并在此基础上合成相应的干扰序列，利用基因重组技术，构建干扰或者过表达的真核质粒；3.将构建好的质粒通过转染试剂转染到肝癌细胞株，并在药物筛选下，得到稳定转染的单克隆，从而扩增得到稳定转染的细胞株；4.在构建成功的肝癌细胞系的基础上，分析Gal-1对肝癌细胞系的迁移、侵袭等的影响，并对机制进行初步的探讨。
　　结果：1.通过对62例原发性肝癌临床标本中Gal-1的量化，并分析与临床数据的关系，发现肝癌中高表达Gal-1的临床样本较肝癌中Gal-1低表达的分化程度低、肿瘤大、转移性高；2.通过对所构建质粒的测序及瞬转到肝癌细胞株中，构建的真核干扰质粒序列正确，干扰效果可；3.经过药物的筛选，明确了各株细胞株的药物筛选浓度，并成功构建了干扰效果好的细胞株；4.对干扰Gal-1细胞株的分析，发现Gal-1干扰后细胞株的迁移及侵袭能力减弱，而Gal-1重组因子（r-Gal）及过表达Gal-1的细胞株则能促进其迁移和侵袭，同时发现Gal-1与肝癌细胞株发生上皮间充质转化相关。
　　结论：1.Gal-1与肝癌的生长、转移相关；2.正确构建真核表达的Gal-1干扰质粒；3.成功构建Gal-1低表达及过表达的肝癌细胞株；4.Gal-1促进肝癌细胞迁移、侵袭，并促进肝癌细胞发生EMT变化。

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引言

第一部分G a l ect in-1在肝癌组织中的表达与临床病理的关系

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨论及结论

结论：

第二部分Galectin-1真核干扰质粒的构建及干扰效果的验证

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 实验讨论与结论

结论

第三部分Galectin-1低表达及过表达肝癌细胞株的建立及与肝癌转移能力的相关性研究

3.1 实验材料

3 .2 实验方法

3 .3 实验结果

3 .4 实验讨论与结论

结论

参考文献

致谢

半乳凝素-1与肿瘤及免疫

参考文献