目的: 拟通过病例-对照研究，探讨位于microRNA（miRNA）编码区和miRNA作用靶点的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）与盆腔器官脱垂（Pelvic Organ Prolapse，POP）遗传易感性的关系；根据POP遗传易感性的分析结果，检测阳性关联位点不同基因型样本阴道壁组织中信使 RNA（Messenger Ribonucleic Acid，mRNA）和目的蛋白的表达，从转录水平及翻译水平阐述阳性关联位点与 POP发生的关系及其生物学意义；并综合分析遗传因素与环境因素的交互作用对POP发病风险的影响；旨在为POP的预防、诊断和治疗提供理论依据。 方法: 1、收集2012年3月至2013年3月就诊于南京军区福州总医院妇产科的291例盆腔器官脱垂病例，并以年龄、居住地为匹配因素，纳入同期300例健康对照者。采集每一研究对象的外周血2ml，对于 POP行手术的病例同时采集其阴道壁组织。 2、通过查阅文献和生物信息学软件分析筛选了位于 miR-146a（rs2910164）、miR-196a-2（rs11614913）、miR-149（rs2292832）、miR-499（rs3746444）编码区和位于COL1A1（rs1061947）、COL1A1（rs1061237）、MMP1（rs2071230）、MMP1（rs470215）、MMP1（rs5854）、MMP2（rs7201）、MMP9（rs9509）、MMP9（rs1056628）、LOXL1（rs3522）3’端非翻译区（3’Untranslated Region，3’UTR）的miRNA结合靶点的基因多态性位点，采用MassARRAY时间飞行质谱等技术检测各个SNP位点的基因型。统计分析均使用SPSS17.0软件，采用χ2检验分析各位点基因型是否符合 Hardy-Weinberg平衡，及两组的基因型分布频率；采用Logistic回归分析评价POP遗传易感性与各个多态性位点的关系；采用分层分析的方法分析体重指数、绝经情况及阴道分娩情况与各个SNPs位点之间的交互作用对POP发病风险的影响。 3、采用Real time-PCR和Western blotting方法检测COL1A1及MMP1基因在不同基因型样本的阴道壁组织中mRNA和蛋白的表达。 结果: 1. miRNA编码区的SNPs与盆腔器官脱垂发病风险的分析结果： 位于miR-196a-2的基因多态性位点（CC vs TT）与POP的发病风险增加显著相关（OR=2.00，95%CI：1.19-3.36，P=0.009）；分层分析表明，该位点与绝经者（CC vs TT，OR=2.13，95%CI：1.11-4.08，P=0.024和CC/CT vs TT，OR=1.60，95%CI：1.01-2.55，P=0.047）、有阴道分娩史者（CC vs TT，OR=2.26，95%CI：1.10-4.63，P=0.026）、体重指数（Body Mass Index，BMI）≥23.5的人群中（CC vs TT，OR=2.48，95%CI：1.16-5.32，P=0.019和CC/CT vs TT，OR=2.00，95%CI：1.14-3.51，P=0.016）的POP发病风险显著增加。位于miR-146a多态性位点的（CC vs TT）在未绝经人群中POP发病风险显著降低（OR=0.09，95%CI：0.01-0.81，P=0.031）。位于miR-499多态性位点的（CC/CT vs TT）在BMI≥23.5人群中与POP发病风险显著相关（OR=1.77，95%CI：1.03-3.04，P=0.038）。 2. miRNA作用靶点的SNPs与盆腔器官脱垂发病风险的分析结果： 位于COL1A1基因的3’端非翻译区的多态性位点rs1061237（TT vs CC）的POP的发病易感性显著降低（OR=0.59，95%CI：0.37-0.95，P=0.031）；分层分析发现，该位点在无阴道分娩史人群与POP发病风险降低显著相关（TT vs CC，OR=0.38，95%CI：0.18-0.79，P=0.009和CT/TT vs CC，OR=0.48，95%CI：0.27-0.87，P=0.016）。位于MMP-1基因的3’UTR区多态性位点rs470215（AG/GG vs AA）与POP发病风险显著增加相关（OR=2.01，95%CI：1.16-3.51，P=0.013），但由于该位点在本研究中所测得的最小等位基因频率（Minimum Allele Frequency，MAF）<0.05，为了提高统计效率，该位点未进行分层分析。位于 MMP-1基因的3’UTR区的多态性位点rs5854与POP的发病风险增加显著相关（TT vs CC，OR=2.76，95%CI：1.20-6.38，P=0.017和CT/TT vsCC，OR=1.87，95%CI：1.08-3.24，P=0.025）；分层分析发现，该位点在绝经人群（CT/TT vs CC，OR=2.05，95%CI：1.08-3.87，P=0.028和TT vs CC，OR=3.37，95%CI：1.27-8.94，P=0.015）、有阴道分娩史人群（CT/TT vs CC，OR=2.21，95%CI：1.12-4.36，P=0.022和TTvs CC，OR=3.95，95%CI：1.43-10.79，P=0.007）、BMI≥23.5人群中（CT/TT vs CC，OR=2.44，95%CI：1.06-5.61，P=0.036和TT vs CC，OR=4.43，95%CI：1.21-16.18，P=0.024）的 POP易感性显著增加。位于 MMP-1基因3’UTR的多态性位点 rs2071230（GA/GG vs AA）在未绝经人群中的POP的易感性显著降低（OR=0.37，95%CI：0.19-0.72，P=0.003）。对位于同一染色体上的位点进行连锁不平衡分析发现，这些位点之间均不存在连锁不平衡关系。 3. rs1061237位点三种基因型的POP患者阴道壁组织中COL1A1基因mRNA表达水平三组差异没有统计学意义（P>0.05）；而在蛋白表达水平，TT基因型的样本中COL1A1蛋白表达明显高于CT基因型和CC基因型组。提示位点rs1061237可能是在转录后水平发挥作用。 4. rs5854位点三种基因型的POP患者阴道壁组织中MMP1基因的mRNA表达水平三组差异无统计学意义（P>0.05）；而蛋白表达水平，TT基因型的样本中MMP1蛋白表达最高，CT基因型次之，CC基因型样本的表达量最低，差异有统计学意义。提示位点rs5854可能是在转录后水平发挥作用。 结论: 1.位于miR-196a-2编码区的基因多态性位点与POP的遗传易感性增加有关；该位点与BMI、阴道分娩史、绝经情况存在交互作用；位于miR-146a编码区的多态性位点与绝经情况存在交互作用；位于miR-499编码区的多态性位点可以通过与BMI发生交互作用，影响POP发病风险。 2.位于COL1A1基因的3’UTR区多态性位点rs1061237与POP的发病易感性降低有关，该位点与阴道分娩情况之间存在交互作用；位于MMP-1基因的3’UTR区多态性位点 rs470215与 POP的发病易感性增加有关；位于 MMP-1基因的3’UTR区的多态性位点rs5854与POP的发病风险增加相关，该位点与BMI、阴道分娩史、绝经情况存在交互作用；位于 MMP-1基因3’UTR的多态性位点rs2071230可以通过与绝经情况发生交互作用，影响 POP的发病风险。因此，rs1061237的TT基因型和rs5854的TT基因型有望成为预测POP遗传易感性的重要指标。 3. COL1A1（rs1061237）多态性位点可能通过影响 miR-3119与 COL1A1基因3’UTR靶位点的结合能力，影响 miR-3119对 COL1A1的调控，导致 COL1A1蛋白表达的增加，从而降低了POP的发病风险。 4. MMP1（rs5854）多态性位点可能通过影响该区域内的miRNA与MMP1基因3’UTR靶位点的结合能力，影响miRNA对MMP1的调控，导致MMP1蛋白的表达增加，而参与POP的发病。
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