戊四氮致癫大鼠不同脑区高迁移率族蛋白-1的表达与意义

摘要

目的:
　　采用戊四氮(PTZ)诱发大鼠慢性癫痫，动态观察不同脑区高迁移率族蛋白-1(High-mobility group box-1,HMGB-1)含量的变化，以及探讨HMGB-1与癫痫的关系。
　　方法:
　　1、慢性癫痫大鼠模型的建立
　　SD雄性大鼠32只，将其随机分为对照组（A组，n=8）和实验组（n=24），对照组予腹腔注射40 mg·k g-1的生理盐水，实验组分别腹腔注射不同浓度的PTZ,其中B组（20 mg·kg-1）、C组（40 mg·kg-1）、D组（60 mg·kg-1），每次注射后密切观察大鼠行为变化至少1小时，记录下大鼠点燃所需天数、潜伏期时间、点燃的数量、存活的数量。
　　2、PTZ致癫大鼠不同脑区HMGB-1的表达
　　SD雄性大鼠40只,将其随机分为正常对照组(A组，n=8)和实验组(n=32）。实验组大鼠采用PTZ40 mg·k g-1一次性腹腔注射，对照组大鼠给予等量的生理盐水腹腔注射，根据癫痫发作后的时间，于其发作后1h（B组）、6h（C组）、24h(D组)、72h（E组）取脑，采用免疫组织化学方法，动态观察海马组织中HMGB-1的变化；RT-PCR方法动态观察脑组织中额叶、海马、中脑中HMGB-1的变化。
　　结果：
　　1、当PTZ浓度为20 mg·k g-1时，发作程度低，不易点燃；当PTZ浓度为60 mg·k g-1时，发作较为剧烈，易点燃，但发作进展快，死亡率比较高，大鼠存活率低；当PTZ浓度为40 mg·k g-1时，发作程度逐渐加重，点燃率较高，大鼠存活率高，不易死亡，发作缓解后仍可自由活动；
　　2、荧光定量PCR显示：幼鼠不同脑区（额叶、中脑、海马）HMGB-1蛋白表达随着时间的推移呈动态升高，其中额叶、海马于6h开始升高（P＜0.05），24 h达高峰（P＜0.05），与24h相比，72 h有所降低（P＜0.05），但仍高于对照组（P＜0.05），中脑1h、6h、24h与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），72小时的HMGB-1蛋白表达明显高于对照组，差异有显著性（P<0.05）；
　　3、海马免疫组化结果显示，各组HMGB-1蛋白平均光密度值与对照组相比逐步升高，其中，B组HMGB-1蛋白表达量与对照组相比有所升高，但差异无统计学意义（P>0.05）；与对照组相比，C组、D组HMGB-1蛋白表达量逐渐增高，差异有统计学意义（P<0.05）；E组蛋白表达量有减少趋势，与D组相比，差异有统计学意义(P＜0.05），但亦显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。
　　结论：
　　1、戊四氮腹腔注射法建立慢性癫痫动物模型的理想浓度为40 mg·kg-1；
　　2、EP发作后HMGB-1蛋白表达明显升高，HMGB-1与癫痫所致大脑损伤密切相关。

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前言

实验一、慢性癫痫大鼠模型的建立

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 方法

2 结果

2.1 行为改变

3 讨论

4 结论

实验二、戊四氮致癫大鼠不同脑区高迁移率族蛋白-1的表达与意义

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3统计处理方法

2 结果

2.1大鼠行为学改变

2.2各组大鼠脑组织不同区域HMGB-1蛋白表达

3 讨论

4 结论

总结与展望

参考文献

致谢

综述

参考文献