钩吻素子抗大鼠Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病性神经病理性疼痛的作用

摘要

糖尿病性神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)，是神经病理性疼痛(neuropathic pain, NPP)的一个重要类型，目前临床上仍缺乏满意的镇痛药物，其治疗的满意率小于≤30％。有关DNP发生机制的探索以及新型的有效防治药物的寻找，为目前研究热点之一。
　　钩吻(Gelsemium elegans Benth)为马钱科植物胡蔓藤的全草，其有效成分为吲哚类生物碱。钩吻素子（koumine, KM）是中国钩吻生物碱单体中含量最高、毒性较低的有效成分，分子量为306.3。课题组大量的前期研究表明，钩吻素子具有高效低毒的抗慢性疼痛作用。然而，钩吻素子对DNP功效如何？有待探讨。
　　鉴此，本文拟在大鼠Ⅰ型、Ⅱ型糖尿病性神经病理性疼痛模型上，以机械痛阈、坐骨神经形态学变化和神经传导速度为指标，观察钩吻素子可能的抗DN P作用及其特点,以期提出钩吻素子抗DNP作用的可能新功效及其理论基础，为其可能的开发利用提供科学依据。主要研究内容如下：
　　1.钩吻素子抗STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠神经病理性疼痛的作用
　　在成功建立大鼠Ⅰ型糖尿病（大剂量腹腔注射STZ）模型的基础上，将大鼠随机分为对照组、模型组以及模型鼠钩吻素子7mg/kg、1.4mg/kg、0.28mg/kg、0.056mg/kg处理组和加巴喷丁100mg/kg治疗组。自建模第22天开始皮下注射对应药物，每天1次，连续7天，建模后每周及每次给药后60min测定大鼠机械痛阈，最后一次测定机械痛阈后进行坐骨神经传导速度的测定，测定后取坐骨神经进行形态学分析，观察钩吻素子对STZ大鼠神经病理性疼痛的治疗作用。
　　1.1连续皮下注射钩吻素子对S TZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠血糖和体重的影响
　　STZ大鼠表现出显著的多饮、多食、多尿以及体重减轻症状，毛色枯黄，精神萎靡。钩吻素子对STZ大鼠的血糖和体重未见显著变化。
　　1.2钩吻素子可显著对抗S TZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠机械痛觉超敏
　　皮下注射(s.c.)钩吻素子具有显著的抗 STZ大鼠机械痛敏作用，钩吻素子各剂量组(7 mg/kg、1.4 mg/kg、0.28 mg/kg、0.056 mg/kg组)大鼠第一次给药后即显效，随着给药时间的延长，到给药后第7天疗效最强，提示钩吻素子具有对抗STZ大鼠机械痛敏的作用。
　　1.3钩吻素子可提高S TZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠坐骨神经神经传导速度
　　钩吻素子皮下注射给药7天后，钩吻素子7mg/kg、1.4mg/kg组大鼠坐骨神经传导速度与模型组相比，呈现加快，具有显著性差异，提示钩吻素子能提高STZ大鼠坐骨神经的神经传导速度。
　　1.4钩吻素子可改善STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠坐骨神经形态的变化
　　结果显示，在钩吻素子7mg/kg、1.4mg/kg、0.28mg/kg治疗组，大鼠坐骨神经髓鞘破坏程度有所改善，空泡现象和板层分离现象明显减少，但在钩吻素子0.056mg/kg治疗组改善不明显，提示钩吻素子能显著改善S TZ大鼠髓鞘的变性程度。
　　2.钩吻素子抗ZDF大鼠神经病理性疼痛的作用
　　在Ⅱ型糖尿病大鼠[ZDF(Zucker diabetic fatty rat)模型鼠]模型上，将ZDF(fa/fa大鼠随机分模型组以及钩吻素子15mg/kg、1.5mg/kg、0.15mg/kg处理组和加巴喷丁100mg/kg治疗组，ZDF(fa/+)为对照组。自ZDF大鼠出生第75天开始灌胃给予对应药物，每天1次，连续10天，每次给药后60min测定大鼠机械痛阈，最后一次测定机械痛阈后取坐骨神经进行形态学分析，观察钩吻素子对ZDF大鼠神经病理性疼痛的治疗作用。
　　2.1连续灌胃给予钩吻素子对ZDF大鼠体重的影响
　　ZDF大鼠在出生第67天后开始表现出显著的多饮、多食、多尿症状。而灌胃给予钩吻素子，每天1次，连续10天，对ZDF大鼠的体重未有显著影响。
　　2.2钩吻素子可显著改善ZDF大鼠机械痛觉超敏
　　灌胃给予（i.g.）钩吻素子具有显著的抗ZDF大鼠机械痛敏作用，钩吻素子各剂量组（15mg/kg、1.5mg/kg、0.15mg/kg组）ZDF大鼠第一次给药后即有显著疗效，随着给药时间的延长，效应逐渐增加，到给药后第10天疗效最强，提示钩吻素子具有缓解ZDF大鼠机械痛敏的作用。
　　2.3钩吻素子可改善ZDF大鼠坐骨神经形态的变化
　　在钩吻素子治疗组，仍可见神经纤维髓鞘变性，但髓鞘病变程度较模型组有不同程度的改善，雪旺细胞结构基本正常，提示钩吻素子能改善 ZDF大鼠髓鞘的变性程度。
　　上述结果提示，
　　1、钩吻素子对Ⅰ型糖尿病性神经病理性疼痛具有治疗作用。
　　2、钩吻素子对Ⅱ型糖尿病性神经病理性疼痛具有治疗作用。

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前言

第一部分 钩吻素子抗S TZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠神经病理性疼痛的作用

1、材 料

1.1 动物

1.2 药品试剂

1.3 仪器

2、方 法

2.1 总体实验方案

2.2 大鼠Ⅰ型糖尿病模型的建立[25]

2.3 机械缩足反射痛阈值测定法[26]

2.4 坐骨神经超薄切片电镜观察[27]

2.5 神经传导速度的测定[28]

2.6 统计分析

3、结 果

3.1 连续皮下注射钩吻素子对STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠血糖和体重的影响

3.2 钩吻素子能显著改善STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠机械痛觉超敏

3.3 钩吻素子能提高STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠坐骨神经的神经传导速度

3.4 钩吻素子能改善STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠坐骨神经形态的变化

4、讨 论

第二部分 钩吻素子抗ZDF大鼠神经病理性疼痛的作用

1、材 料

1.1 动物

1.2 药品试剂

1.3 仪器

2、方 法

2.1 总体实验方案

2.2 机械缩足反射痛阈值测定法[26]

2.3 坐骨神经超薄切片电镜观察[27]

2.4 统计分析

3、结 果

3.1 连续灌胃给予钩吻素子对ZDF大鼠体重的影响

3.2 钩吻素子能显著改善ZDF大鼠机械痛觉超敏

3.3 钩吻素子能改善ZDF大鼠坐骨神经形态的变化

4、讨 论

结论

参考文献

致谢

综述

参考文献