去乙酰化酶SIRT1调控卵丘颗粒细胞凋亡对单精子卵胞浆内显微注射助孕的影响

摘要

目的：本研究拟对去乙酰化酶SIRT1调控人卵丘颗粒细胞凋亡对单精子卵胞浆内显微注射的影响进行研究，并探讨SIRT1、FOXO3a通路调控颗粒细胞凋亡的机制。
　　方法：采用免疫细胞化学染色、Western-blot法检测人卵丘颗粒细胞 SIRT1和FOXO3a蛋白的表达；采用Real-time PCR技术检测SIRT1和FOXO3a mRNA的表达；采用流式细胞术检测凋亡蛋白Caspase-3的活化情况，分析颗粒细胞凋亡率；采用化学发光法检测卵泡液各项生化免疫指标。
　　结果：⑴人卵丘颗粒细胞SIRT1蛋白表达与颗粒细胞凋亡显著相关（P＜0.05）。⑵随着颗粒细胞SIRT1表达增高，颗粒细胞凋亡率随之升高，穿卵泡数、获卵数、ICSI卵子数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、囊胚形成数、囊胚冷冻数则随之下降（P＜0.01）。⑶人卵丘颗粒细胞 SIRT1基因和蛋白的表达与 FOXO3a表达显著相关（P＜0.01）。4、卵泡液雌激素E2水平与颗粒细胞SIRT1表达显著相关（P＜0.01）。
　　结论：人卵丘颗粒细胞中SIRT1蛋白表达增加可促进颗粒细胞凋亡，使ICSI助孕过程中的穿卵泡数、获卵数、ICSI卵子数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、囊胚形成数、囊胚冷冻数等指标受到影响，从而影响 ICSI助孕结局。其作用机制可能是FOXO3a通过调控SIRT1基因转录诱导卵丘颗粒细胞凋亡。

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前言

第一部分 SIRT1表达与颗粒细胞凋亡相关性及其对单精子卵胞浆内显微注射助孕影响

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 实验结果

2.1 病例人口学资料描述性统计

2.2 ICSI助孕妊娠与未妊娠组病例基本资料比较分析

2.3 ICSI助孕妊娠与未妊娠组助孕各项指标比较分析

2.4 ICSI助孕妊娠与未妊娠组SIRT1表达与细胞凋亡结果比较分析

2.5 SIRT1表达与卵丘颗粒细胞凋亡及ICSI助孕各项指标相关分析

2.6 颗粒细胞凋亡及ICSI助孕各项指标相关分析

3 讨论

4 小结

第二部分 FOXO3a调控SIRT1表达对人卵丘颗粒细胞凋亡及卵泡微环境影响因素分析

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 实验方法

1.3 统计处理

2 实验结果

2.1 细胞化学方法检测SIRT1与FOXO3a蛋白表达

2.2 卵丘颗粒细胞的SIRT1与FOXO3a蛋白表达率与其凋亡率相关分析

2.3 western-blot分析SIRT1与FOXO3a蛋白表达

2.4 Real-time RT-PCR检测SIRT1与FOXO3a基因表达

2.5 卵泡微环境对SIRT1影响因素分析

3 讨论

4 小结

5.结 论

参考文献

综述: 去乙酰化酶SIRT1的生理调节功能

致谢