粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在大鼠心内膜炎中的作用

摘要

目的：
　　探讨粪肠球菌心内膜炎抗原（EfaA)在大鼠感染性心内膜炎中的作用，为临床上预防和治疗粪肠球菌感染性心内膜炎的后续研究奠定基础。
　　方法：
　　1、心内膜炎大鼠模型的建立及评价
　　右侧颈动脉导管插入术建立粪肠球菌心内膜炎大鼠模型。将PE-50导管从大鼠右侧颈动脉插入，皮下固定，24小时后，经大鼠尾静脉注射0.5ml过夜培养的粪肠球菌菌液（1×108CFU/ml），72小时后腹腔麻醉处死大鼠。解剖大鼠剥离心脏，取出主动脉瓣瓣膜赘生物，称取赘生物湿重，计数赘生物分离培养菌落数（CFU/g），主动脉瓣病理组织HE染色观察，综合评价心内膜炎大鼠模型是否建立成功。
　　2、粪肠球菌efaA-野生株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的比较
　　对大鼠进行分组，导管插入成功后24小时，经大鼠尾静脉分别注射0.5ml过夜培养的粪肠球菌efaA-野生株、粪肠球菌efaA+转化株和粪肠球菌efaA-空白转化对照株菌液，菌密度均为1×108CFU/ml。72小时后腹腔麻醉处死大鼠，解剖大鼠剥离心脏，取出主动脉瓣瓣膜赘生物，比较3组大鼠的赘生物湿重、瓣膜赘生物研磨匀浆后细菌计数（CFU/g）及主动脉瓣病理组织HE染色情况。
　　3、粪肠球菌efaA-野生株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的死亡率比较
　　对大鼠进行分组，导管插入成功后24小时，经大鼠尾静脉分别注射0.5ml过夜培养的粪肠球菌efaA-野生株、粪肠球菌efaA+转化株和粪肠球菌efaA-空白转化对照株菌液，菌密度均为1×108CFU/ml。3天后观察大鼠每天死亡数。
　　4、粪肠球菌efaA-空白对照株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的赘生物的药物敏感性比较K-B纸片扩散法检测粪肠球菌efaA+转化株对常见抗生素的药物敏感性；根据抑菌圈直径大小选择粪肠球菌efaA+转化株较为敏感的抗生素—青霉素，测其MBC值；分别取efaA+转化株、efaA-空白对照株菌液感染的心脏瓣膜赘生物，每组分别于青霉素溶液（浓度为160μg/ml）中和生理盐水中浸泡24小时，分别研磨匀浆细菌计数。
　　结果：
　　1.大鼠心脏瓣膜可见赘生物形成，赘生物平均重量为15.3 mg，赘生物匀浆后分离培养，平均菌落计数为6.79×1010CFU/g，心脏瓣膜病理组织HE染色观察可见主动脉瓣膜上有大量炎性细胞浸润，并见大量由血小板、纤维素、坏死组织、炎症细胞、大量细菌及肉芽组织所构成的赘生物附着在动脉瓣膜组织上。成功建立心内膜炎大鼠模型。
　　2.粪肠球菌efaA-野生株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的比较结果如下：efaA+转化株组，赘生物湿重平均值为15.33mg，细菌计数为6.79×1010CFU/g；野生株组赘生物湿重平均值为7.27mg，细菌计数为3.40×1010CFU/g；空白对照组赘生物湿重平均值为8.51mg，细菌计数为3.32×1010CFU/g。
　　①转化株组与野生株组比较赘生物湿重值更高（P<0.05），细菌计数更高（P<0.05），主动脉瓣炎症细胞浸润更多，炎症更加明显；
　　②野生株组与空白对照组比较赘生物湿重值、细菌计数以及主动脉瓣炎症情况均差异不大（P>0.05）。
　　3.空白对照组与野生株组注射菌液7天死亡率分别为30％和40%，而转化株组7天死亡率为70%，其余大鼠1周后处死解剖均可见不同程度的心内膜炎。
　　4.粪肠球菌efaA-空白对照株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的赘生物的药物敏感性比较结果如下：转化株组赘生物用青霉素溶液处理和生理盐水处理活细菌数均值分别为5.759×1010CFU/g、6.204×1010CFU/g，比值为0.928；空白对照组赘生物用青霉素溶液处理和生理盐水处理活细菌数均值分别为1.058×1010CFU/g、2.754×1010CFU/g，比值为0.384。
　　结论：
　　1.成功构建心内膜炎大鼠模型；
　　2.粪肠球菌EfaA蛋白有利于大鼠感染性心内膜炎的发生发展。
　　3.粪肠球菌efaA+转化株在心内膜炎中所形成的生物膜更为致密，对抗生素的敏感性较差。粪肠球菌efaA基因在体内有助于生物膜的形成及感染性心内膜炎的发生发展。

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封面

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中英文对照

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1.材料

2. 方法

结果

1.心内膜炎大鼠模型的建立及评价

2. 粪肠球菌efaA-野生株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的比较

3. 粪肠球菌efaA-野生株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的死亡率比较

4. 心内膜炎赘生物的药敏实验

讨论

1.心内膜炎大鼠模型的建立及评价

2. 粪肠球菌efaA-野生株和efaA+转化株引起大鼠心内膜炎的比较

3. 心内膜炎赘生物的药敏实验

结论

参考文献

综述：粪肠球菌毒力因子在粪肠球菌心内膜炎中的作用

致谢