载脂蛋白A-I与声带息肉形成的相关性及其作用机制的研究

摘要

目的：⑴探讨血清中ApoA-Ⅰ与声带息肉的形成的相关性；⑵探讨ApoA-Ⅰ蛋白在声带息肉组织中的组织学的分布和表达情况；⑶探讨ApoA-I对VEGF诱导的HUVECs的增殖活性和通透性的影响。
　　方法：①采用病例对照研究方法，对89例行手术治疗的声带息肉患者和87例正常对照者的血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白A-Ⅰ（ApoA-Ⅰ）、载脂蛋白B（ApoB）、ApoA-Ⅰ/ApoB血脂的检测以及声带息肉形成的相关因素如用声过度、滥用嗓音、吸烟、饮酒等的问卷调查；对声带息肉患者行电子喉镜检查、拍照，应用ImageJ软件，计算出息肉的面积与声带面积的比值，作为声带息肉的大小。运用SPSS20.0统计学软件采用非匹配的病例对照研究方法对病例组和对照组的定量资料进行独立性t检验、对定性资料进?2检验，并进一步采用多因素Logistic回归方法分析血脂等因素与声带息肉的相关性。②应用免疫组化及蛋白印迹技术对21例声带息肉和7例正常声带粘膜的外科病理标本进行ApoA-Ⅰ的检测，观察ApoA-Ⅰ蛋白在组织中的表达情况，并比较两组间ApoA-Ⅰ的表达水平。③在原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养中，用不同浓度的ApoA-Ⅰ和VEGF干预HUVECs，MTT和BRDU方法检测HUVECs的增殖活性，TranswelⅠ系统检测透过单层HUVECs的荧光标记的葡聚糖以此代表细胞的通透性。
　　结果：⑴声带息肉组与正常对照组血清中TG、LDL-C、ApoB、ApoA-Ⅰ/ApoB差异没有统计学意义（P>0.05）；TC、HDL-C、ApoA-Ⅰ差异有统计学意义（P<0.05）。经Logistic回归分析显示用声过度、滥用嗓音是声带息肉的危险因素(P<0.05)， OR值分别为5.675和12.781；ApoA-I是声带息肉的保护因素(P<0.05)，OR值为0.511；TC、HDL-C不是声带息肉形成的相关因素（P>0.05）。女性声带息肉的大小与血清中ApoA-Ⅰ呈负相关r=-0.349，P=0.032；男性声带息肉的大小与血清中ApoA-Ⅰ无相关（P>0.05）。⑵免疫组化结果显示ApoA-Ⅰ主要在声带息肉的血管内皮细胞的细胞浆染色明显，声带息肉组织中ApoA-Ⅰ阳性表达率较声带正常粘膜组高,差异有显著性(P<0.05)。蛋白印迹检测ApoA-Ⅰ、VEGF在声带息肉组织蛋白中的表达较正常声带粘膜组织的高。⑶MTT法和BRDU法检测提示ApoA-I抑制VEGF诱导的HUVECs细胞代谢增殖活性。在VEGF（10ng/ml）组中加入ApoA-Ⅰ（50-1000ug/ml）较VEGF（10ng/ml）组HUVECs细胞代谢增殖活性减低（P＜0.05），并呈浓度依赖性。在VEGF组中加入VEGF（20ng/ml）后FITC-葡聚糖透过率水平明显较对照组增高（P＜0.05），呈时间依赖性，浓度依赖性。在ApoA-Ⅰ+VEGF实验组中加入不同浓度 ApoA-Ⅰ（5，10、30、50、100ug/ml）45分钟后加入VEGF（20ng/ml）、FITC-葡聚糖90分钟，检测FITC-葡聚糖透过率水平。与VEGF（20ng/ml）组相比，ApoA-Ⅰ+VEGF实验组随着ApoA-Ⅰ浓度的增高，VEGF（20ng/ml）诱导的FITC-葡聚糖透过率水平呈下降趋势。
　　结论：①发现血清中的ApoA-Ⅰ与声带息肉呈负相关，血清中的ApoA-Ⅰ水平增高是声带息肉形成的保护因素，ApoA-Ⅰ可降低声带息肉发病的风险，血清中的ApoA-Ⅰ水平与女性声带息肉的大小呈负相关。这些发现对声带息肉的预防和治疗具有重要的临床作用。②ApoA-Ⅰ主要分布在声带息肉的血管内皮细胞的细胞浆，在声带息肉组织中的表达比正常声带粘膜组织强③ApoA-Ⅰ可抑制VEGF诱导HUVECs细胞代谢增殖活性、通透性。提示血清中的ApoA-Ⅰ具有保护血管内皮细胞的作用，对声带息肉中增高的VEGF的促进血管内皮细胞增生和通透性增强的作用可能起抑制作用。当血清中ApoA-Ⅰ降低，机体保护血管内皮细胞的作用减弱，VEGF引起的血管内皮细胞增殖、通透性增加未能受到抑制，血浆内某些物质包括ApoA-Ⅰ渗出至组织间隙，易促进声带息肉形成。这一研究从机体抗炎保护的角度阐述了声带息肉形成的一个新的机制，开拓了新的领域，丰富了声带息肉形成的学说。

目录

声明

附录：

前言

第一部分血清中载脂蛋白 A-I与声带息肉形成的相关性

研究对象与方法

结果

讨论

结论

第二部分载脂蛋白A1在声带息肉组织中的表达

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分载脂蛋白 A-I对VEGF诱导HUVECs细胞增殖活性、通透性的影响

材料与方法

结果

讨论

结论

全文结论

参考文献

综述：载脂蛋白A-I的抗炎作用

致谢