乳铁蛋白对去卵巢大鼠IGF-IR、IGFBP-2、IGFBP-4mRNA表达影响的研究

摘要

目的：旨在观察乳铁蛋白（Lactoferrin LF）对去卵巢大鼠IGF-IR/IGFBP-2/IGFBP-4mRNA基因表达的影响，探讨乳铁蛋白是否通过介导IGF-IR/IGFBP-2/IGFBP-4mRNA基因表达机制治疗绝经后骨质疏松。
　　方法：选取6个月大小，体重约在270g左右，雌性SD（Sprague-Dawley）大鼠70只，适应性喂养1周后，入组大鼠随机分为去卵巢模型组（Ovx）60只与假手术组（Sham）10只，把去卵巢大鼠模型组再次分组，随机分为不同干预治疗组6组，骨质疏松模型组（Con组）10只，实验中作为对照组：[蒸馏水2ml/(只·天)灌胃]，牛血清白蛋白组（BSA组）10只：[100mg/kg/d+蒸馏水2ml，灌胃]，不同浓度剂量的乳铁蛋白治疗组LF1-3（LF1、LF2和LF3组各10只）：[0.1g/（kg·d）+蒸馏水2ml，1g/（kg·d）+蒸馏水2ml，2g/（kg·d）+蒸馏水2ml，灌胃]，雌激素治疗组（E2组）10只[0.1 mg/（kg·周），肌肉注射]。连续干预治疗6个月后，通过观察乳铁蛋白干预前后，体重有无明显差异；通过制作HE石蜡病理切片,使用显微镜观察骨组织结构变化。再通过Real Time RT-PCR法即实时荧光定量聚合酶链反应，检测去卵巢大鼠骨组织IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4mRNA表达的改变。
　　结果：⑴乳铁蛋白干预前，各组大鼠体重均无明显差异，均P>0.05，大鼠去卵巢手术后，以各种方法干预治疗6个月后，除了E2组外，其余各组大鼠体重均明显升高，均P<0.05，提示差别有统计学意义，体重增加最多的组为Con组，Con组大鼠均明显重于Sham组和E2组，均P<0.05，提示差别有统计学意义，以不同浓度乳铁蛋白进行干预的LF1-3组及牛血清白蛋白组大鼠体重与Con组相比，虽然均比Con组体重低，但均P>0.05，提示无统计学意义。⑵骨组织HE染色病理切片显示：Sham组、E2组骨小梁排列密集、饱满，间距小，细胞数量多；而Con组、BSA组骨小梁变细、断裂，骨小梁距离增宽，排列稀疏，细胞数量少，骨小梁结构出现较大的空白区域；而乳铁蛋白灌胃组LF1-3介于二者之间，且骨小梁排列紧密程度LF3好于LF2，LF2好于LF1。表明成功建立去卵巢大鼠骨质疏松模型。⑶实时荧光定量PCR结果显示：Con组IGFBP-2、 IGFBP-4 mRNA相对于Sham组，相对表达量均显著增高，均P<0.01，差别有显著统计学意义；相对于Sham组，Con组IGF-1RmRNA相对表达量明显降低，均P<0.01，差别有显著统计学意义；与Con组比较LF1-3组（100 mg/kg,1 g/kg and2 g/kg）与E2组IGFBP-2、IGFBP-4mRNA相对表达量明显下降，且随着乳铁蛋白浓度的升高下降得越明显，均P<0.01，差别有显著统计学意义；而LF2-3组（1 g/kg and2 g/kg）与E2组IGF-1R mRNA相对表达量均显著高于Con组，且随着乳铁蛋白浓度的升高上升得越明显，均P<0.05，差别有统计学意义，牛血清白蛋白BSA组(100mg/kg/d)IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4mRNA相对表达量相对于Con组基本不变，均P>0.05，两者之间无统计学意义。
　　结论：①成功建立去卵巢大鼠骨质疏松模型。②乳铁蛋白可能通过抑制IGFBP-2、IGFBP-4mRNA水平，促进IGF-1RmRNA水平的表达来改善骨质疏松。

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前言

第一部分 去卵巢大鼠骨质疏松模型的构建及骨形态学的改变

1．材料与方法

1.1实验材料

1.2 实验方法

2．结果

2.1各组大鼠体重指标在乳铁蛋白干预前后的变化：

2.2 去卵巢后大鼠子宫的变化

2.3 去卵巢后大鼠骨组织HE染色变化

3.讨论

第二部分 乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4mRNA的影响

1.1实验动物

1.2实验药品试剂

1.3实验仪器

1.4主要试剂溶液的配制：

2.方法

2.1动物分组与造模

2.2引物设计与合成

2.3大鼠骨组织总RNA的提取及浓度的测量

2.4逆转录反应

2.5 Real time PCR反应

2.6 IGF-1，IGFBP-2 ， IGFBP-4mRNA相对表达量的计算

3.统计分析方法

4.结果

通过实时荧光定量PCR方法检测IGF-1R、IGFBP-2、 IGFBP-4 mRNA表达水平

5.讨论

5.1IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4简介：

5.2乳铁蛋白对去卵巢大鼠股骨IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4表达的影响

全文总结

参考文献

综述： 课题综述IGFS调节系统与骨代谢关系的研究

致谢