组蛋白去乙酰化酶抑制剂Entinostat诱导胰腺癌细胞凋亡及其分子机理研究

摘要

目的： 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替诺特（Entinostat，MS-275）对HPAF-Ⅱ和Mpanc96两种胰腺癌细胞诱导凋亡作用，进一步探讨MS-275体外诱导胰腺癌细胞凋亡的相关分子机理，为MS-275在胰腺癌治疗的临床应用提供可参考的理论依据。 方法： 1、以胰腺癌细胞系HPAF-Ⅱ和Mpanc96为研究对象，胰腺癌细胞的培养使用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，置于5%CO2、37℃的饱和湿度的温箱中培养。观察胰腺癌细胞的形态及被MS-275处理后显微镜下的变化。 2、用MTS法分别检测在不同MS-275浓度条件下处理72h后HPAF-Ⅱ和Mpanc96两种胰腺癌细胞的存活情况，计算MS-275分别作用两种胰腺癌细胞的IC50，并根据实验组与对照组的存活比率绘制存活曲线进行比较分析。 3、用Western Blotting检测同一MS-275浓度不同作用时间下HPAF-Ⅱ和Mpanc96两种胰腺癌细胞凋亡信号通路相关蛋白Akt、pAkt、MAPK、pMAPK、mTOR、pmTOR、Survivin、PARP、Caspase-3等的表达情况，对其表达情况的不同进行比较分析。 结果： 经MS-275处理过的胰腺癌细胞形态学上呈现凋亡特征。MTS法检测发现，HPAF-Ⅱ和Mpanc96两种胰腺癌细胞均随着MS-275浓度增加而出现细胞存活比率递减。MS-275对HPAF-Ⅱ和Mpanc96细胞的IC50分别为1.64uM/L及3.61uM/L。Western Blotting结果显示MS-275作用可下调HPAF-Ⅱ和Mpanc96细胞内Akt和mTOR的磷酸化水平，提示PI3K/AKT/mTOR信号转导通路被特异性地抑制；同时Survivin蛋白的表达水平显著降低，而凋亡指示蛋白PARP和Caspase-3蛋白的降解水平随着MS-275作用时间延长而增强，这表明MS-275诱导两种胰腺癌细胞HPAF-Ⅱ和MPanc96的凋亡效应存在明显的作用时间依赖性。 结论： MS-275在体外实验中能有效呈浓度及作用时间依赖性地抑制HPAF-Ⅱ和Mpanc96两种胰腺癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡。在HPAF-Ⅱ及Mpanc96两种胰腺癌细胞中存在PI3K/Akt/mTOR信号转导通路的激活。MS-275诱导胰腺癌细胞凋亡的机制与阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路、下调Survivin蛋白表达从而激活Caspase-3有关。本研究为组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275作为抗胰腺癌药物的开发和应用奠定理论基础。

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 MS-275对两种胰腺癌细胞的毒性作用

2Western Blotting检测凋亡相关蛋白的表达情况

3Western Blotting检测相关信号通路蛋白的表达情况

讨论

1 MS-275对胰腺癌细胞株HPAF-Ⅱ及Mpanc 96细胞均有杀伤作用

2 MS-275可通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导胰腺癌细胞凋亡

结论

参考文献

综述:胰腺癌治疗现状及组蛋白去乙酰化酶

参考文献