Exendin-4拮抗棕榈酸介导的胰岛β细胞TLR4/JNK/Bax信号通路的研究

摘要

目的：研究脂毒性对胰岛βTc6细胞TLR4/JNK/Bax通路的影响，以及细胞凋亡和胰岛素分泌的变化，并探讨Exendin-4对上述机制的干预作用。 方法： 1.体外培养胰岛βTc6细胞，将βTC6细胞分对照组、BSA（Bovine Serum Albumin,牛血清白蛋白）组（0.5%BSA）、棕榈酸（Palmitic acid,PA）组（0.5mmol/L）干预24小时,流式细胞术测定细胞凋亡水平，同时ELISA法检测胰岛素分泌水平，Western Blot法检测TLR4、p-JNK、JNK、Bax及Bcl-2蛋白表达情况。 2.分别使用TLR4阻滞剂(CLI-095)或JNK阻滞剂(SP6001215)，将βTC6细胞分为六组，分别为对照组、PA组（0.5mmol/L的PA干预24h）、CLI-095组（3umol/L CLI-095处理细胞24h）、SP600125组（25umol/L SP600125处理细胞24h）、PA+CLI-095组（3umol/L CLI-095预处理细胞4h，再予3umol/L CLI-095+0.5mmol/L的PA处理细胞24h）和PA+SP600125组（25umol/L SP600125预处理细胞4h，再予25umol/L SP600125+0.5mmol/L的PA处理细胞24h），观察Bax及Bcl-2蛋白表达水平。 3.探讨Exendin-4对PA介导的βTC6细胞脂性凋亡的保护作用。将βTC6细胞分对照组、PA组（0.5mmol/L PA干预24h）、Exendin-4组（50nmol/L Exendin-4干预24h）及Exendin-4+PA组（50nmol/L Exendin-4预孵育细胞24h后再与50nmol/L Exendin-4联合0.5mmol/L PA共同干预24h），流式细胞术观察细胞凋亡水平，ELISA法检测胰岛素分泌水平，Western Blot法检测TLR4、p-JNK、JNK、Bax及Bcl-2蛋白表达情况。 结果： 1. PA作用24h后，细胞凋亡率升高；胰岛素分泌功能下降；TLR4、p-JNK、Bax蛋白表达上调，Bcl-2蛋白表达下调。PA诱导的脂毒性凋亡在应用TLR4阻滞剂或JNK阻滞剂后Bax蛋白表达下调，Bcl-2蛋白表达上调。 2. Exendin-4干预后，胰岛β细胞凋亡率减少，胰岛素分泌功能改善，TLR4、p-JNK、Bax蛋白表达下调，Bcl-2蛋白水平上调。 结论： 1. PA可以通过TLR4/JNK/Bax通路介导胰岛β细胞的脂性凋亡。 2. Exendin-4可能部分通过抑制TLR4-JNK-Bax通路，拮抗PA介导的β细胞脂性凋亡，改善胰岛素分泌功能。

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引言

材料和方法

1. 实验材料

1.1 细胞株

1.2 药品与试剂

1.3 仪器和器材

2. 方法

2.1 干预试剂配制

2.2 Western Blot相关试剂配制

2.3 KRBB缓冲液配置

2.4 小鼠胰岛素瘤细胞株的培养

2.5 实验分组

2.6 酶联免疫吸附实验(ELISA)测定

2.7Annexin V-FITC PI双染，流式细胞术检测细胞凋亡

2.8 Western Blot

2.9 统计学方法

结果

1 PA对βTC6细胞TLR4/JNK/Bax通路的影响

1.1 PA对βTC6细胞脂毒性凋亡的影响

1.2 PA对βTC6细胞胰岛素分泌的影响

1.3 PA对βTC6细胞TLR4/JNK/Bax信号通路的影响

2 Exendin-4对PA诱导的胰岛βTc6细胞脂毒性损害的保护作用

2.1 Exendin-4对PA诱导βTc6细胞脂毒性凋亡的影响

2.2 Exendin-4对PA诱导βTc6细胞胰岛素分泌的影响

2.3 Exendin-4对PA诱导βTc6细胞TLR4/JNK/Bax信号通路的影响

讨论

结论

参考文献

综述:JNK和糖尿病并发症

致谢