miR-10a-5p对人骨髓间充质干细胞定向分化成骨调控作用的研究

摘要

目的： 人骨髓间充质干细胞（humanbone marrow mesenchymal stem cells，hBMSCs）是具有多向分化潜能的非造血来源多能干细胞，它在特定条件下，可向骨细胞、脂肪细胞及神经元细胞等方向分化。此类细胞易于分离、培养以及扩增，扩增后仍保留分化潜能，并且具有低免疫原性、免疫调节功能、易于转染和稳定表达外源基因等特征。因此，它有望应用于牙根吸收、牙槽骨丧失等组织修复的治疗。 microRNAs（miRNAs）是一类长约为16～25 bp的非编码RNA，能够调控特定的靶基因表达。大量研究表明，干细胞的增殖、分化等均处于 miRNAs的调控之中。本课题通过体外及体内实验对 miR-10a-5p进行功能验证，明确其在hBMSCs向成骨方向分化中的生物学作用，为hBMSCs作为种子细胞提高分化能力提供理论依据。 方法： 1.利用免疫细胞化学、成骨/成脂诱导染色鉴定复苏传代后的 hBMSCs的来源及分化能力。 2.利用化学合成的miR-10a-5p模拟物和抑制物瞬时转染 hBMSCs，改变hBMSCs中miR-10a-5p的表达量。使用人骨髓间充质干细胞成骨诱导液诱导转染后的hBMSCs分化成骨，对成骨相关蛋白进行转录和翻译水平检测。 3.成骨诱导上调/下调hBMSCs中miR-10a-5p表达并孵育于HA-TCP支架植入8 w雌性BABL/c裸鼠背部，常规饲养8 w后取材切片，行Goldner’s三色染色，检测体内矿化能力的差异。 结果： 1.hBMSCs阳性表达间充质干细胞表面标志物CD44，而阴性表达造血干细胞标志物CD34；同时经成骨诱导21 d茜素红矿化染色显示，诱导组红染的矿化结节明显多于对照组；成脂诱导21 d后油红O染色显示，诱导组的橘红色脂滴较对照组多。 2.体外实验表明，经成骨诱导培养上调/下调miR-10a-5p的hBMSCs表达量，上调组ALP、RUNX2成骨相关基因表达量显著降低，而下调组表达上升。 3.体内实验切片染色结果同对照组相比，下调组的矿化程度高于对照组，而上调组仅处于矿化早期阶段。 结论： 1.hBMSCs为间充质组织来源，而非造血组织来源，并且具有多向分化潜能。 2.miR-10a-5p负性调控hBMSCs成骨方向分化。

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前言

第一部分 人骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

引言

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第二部分 miR-10a-5p对人骨髓间充质干细胞定向分化成骨调控作用的体外实验

引言

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第三部分 miR-10a-5p对人骨髓间充质干细胞定向分化成骨调控作用的体内实验

引言

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

全 文 总 结

参考文献

综述：miR-10a的生物学功能及相关机制研究进展

致谢