芦荟多糖通过VEGFR-2介导的PKC信号通路调控血管内皮细胞增殖和促进创面愈合的作用机制

摘要

目的：探讨芦荟多糖通过VEGFR-2介导的PKC信号通路调控血管内皮细胞增殖及其促进创面愈合的作用机制。 方法：1体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，按芦荟多糖浓度随机分为0(空白对照组),100,200,400 mg/L组；电子显微镜观察各组HUVECs的超微结构；MTT法检测各组HUVECs的增殖活性；ELISA检测各组HUVECs细胞培养上清液中EGFL7、Ang-2、TGF-β1、bFGF和SDF-1α的水平。 2体外培养 HUVECs,按芦荟多糖浓度和加入 PKC抑制剂随机分为空白对照组(0mg/L)、芦荟多糖组(100,200,400mg/L)、空白抑制剂组(0+mg/L,Go6983,10nM)、含芦荟多糖抑制剂组(100+,200+,400+ mg/L；Go6983,10nM)；抑制剂组加入药物作用前，使用 FPP(10mM)预处理30min以完全阻断Ras通路；Western Blot检测各组细胞PKC、Erk1/2以及p-PKC和p-Erk1/2蛋白表达水平,q-PCR检测各组细胞PKC和ERK2 mRNA的表达水平。 3 C57bl/6小鼠共102只,随机分为假烫组和实验组，实验组小鼠建立深II°烫伤模型,又分为生理盐水组、磺胺嘧啶银组、基质组、芦荟烧伤膏组；HE染色观察各组创面组织病理改变,ELISA法检测各组创面组织中EGFL7、TGF-β1等因子含量,免疫组化法检测各组创面组织中PKC蛋白的表达情况。 结果:1、电镜结果显示各组细胞结构完整，其中200mg/L,400mg/L芦荟多糖组细胞分裂相较多；与空白对照组相比，MTT检测结果显示200mg/L和400mg/L芦荟多糖组细胞增殖活性明显增强（P<0.05），ELISA检测结果显示芦荟多糖组细胞培养上清液中EGFL7、Ang-2和TGF-β1水平显著增加（P<0.05），而bFGF和SDF-1α水平则无明显改变。 2、与空白对照组比较,芦荟多糖组PKC、Erk1/2蛋白表达及其磷酸化水平明显增强（P<0.05）,空白抑制剂组PKC、Erk1/2蛋白表达及其磷酸化水平明显减弱（P<0.05）；与空白抑制剂组比较,芦荟多糖抑制剂组PKC、Erk1/2蛋白表达及其磷酸化水平明显增强（P<0.05）。与空白对照组比较,芦荟多糖组PKC mRNA、ERK2 mRNA表达水平呈明显增加（P<0.05）,空白抑制剂组PKC mRNA、ERK2 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）；与空白对照组比较,含芦荟多糖抑制剂组PKC mRNA、ERK2mRNA的表达水平也呈明显增加（P<0.05）。 3、烫伤后,芦荟烧伤膏组创面组织上皮覆盖加快,新生血管增多；芦荟烧伤膏组第3、7d创面组织中TGF-β1和EGFL7水平与各对照组比较均呈显著性增加(P<0.05)；烫伤后第10d,芦荟烧伤膏组创面组织中EGFL7水平仍维持在较高水平,显著高于磺胺组和基质组(P<0.05)；烫伤后7、10、14d芦荟多糖组创面组织中PKC蛋白表达水平含量明显高于各对照组(P<0.05)。 结论：芦荟多糖能有效刺激血管内皮细胞的增殖和促进EGFL7、Ang-2和TGF-β1等细胞因子的分泌，其作用途径之一是通过促进PKC蛋白的表达及其磷酸化，引起MAPK级联反应，调控血管内皮细胞的增殖，促进创面组织新生血管的形成和创面愈合。

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前言

第一部分芦荟多糖对体外培养HUVECs生长的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分芦荟多糖通过PKC/ERK信号通路促进血管内皮细胞增殖的作用机制

材料与方法

结果

讨论

小结

第三部分芦荟多糖对小鼠深Ⅱ°烫伤创面组织的影响及其作用机制

材料与方法

结果

讨论

小结

结论

参考文献

综述：血管生成因子对创面愈合的作用

致谢