小分子直接重编程肝癌细胞为肝细胞样细胞及其机制研究

摘要

背景:肝细胞癌(HCC)是全世界第二大致死性肿瘤。近一半的全球新诊断病例和死亡病例发生在中国，肝癌也是第三大最常见的恶性肿瘤。至今，手术切除仍是早期肝癌患者最主要和最有效的治疗方法。然而,绝大多数患者诊断时已经失去了手术的机会。其他治疗方法,包括射频消融术、TACE、化疗以及新出现的免疫治疗和靶向治疗(精准医学)等，由于肝癌的高度异质性和耐药性而致效果非常有限。因此，寻找控制或消除肝癌的新思路和新技术，仍然是肝癌治疗研究的重要任务。 诱导细胞重编程是转换细胞类型的新技术。在重编程过程中,细胞的生物学行为、基因表达谱和表观遗传状态都发生了巨大的变化。用重编程的技术和方法将肝癌细胞转变为肝细胞样细胞，可为控制或治愈肝癌提供新的可能性。 方法: 1.通过流式细胞术，研究小分子化合物对肝癌细胞SMMC-7721和HepG2凋亡的影响。 2.通过CCK8生长曲线、Cell cycle、Edu掺入实验、迁移侵袭实验、平板克隆、软琼脂克隆、体内成瘤等实验，研究小分子化合物对肝癌细胞SMMC-7721和HepG2肿瘤生物学行为的影响。 3.通过免疫染色、Elisa检测、糖原油红染色、RT-PCR等实验，明确被小分子化合物重编程的肝癌细胞SMMC-7721和HepG2细胞获得正常肝细胞特征和功能并表达肝细胞相关基因。 4.通过Western blot技术，研究小分子化合物重编程肝癌细胞SMMC-7721和HepG2为无致瘤性肝细胞样细胞的分子机制。 结果: 1.重编程过程伴随肝癌细胞凋亡 2.被重编程的肝癌细胞肿瘤生物学行为丧失 2.1 被重编程转化的肝癌细胞形态的改变 2.2 被重编程转化的肝癌细胞增殖能力降低 2.3 被重编程转化的肝癌细胞侵袭和转移能力丧失 2.4 被重编程转化的肝癌细胞体外生长不形成克隆 2.5 被重编程转化的肝癌细胞丧失体内致瘤性 3.被重编程的肝癌细胞获得正常肝细胞特征和功能 4.小分子化合物抑制肿瘤相关信号通路蛋白的活性 结论:利用小分子化合物调节细胞信号和表观遗传状态,可以将肝癌细胞转变为在体内外均无致瘤性的肝细胞样细胞。这一过程伴随着不同程度细胞凋亡的诱导。我们的研究表明细胞重编程技术可以应用于肝癌的治疗研究。研究结果为肝癌的治疗研究提供了新的思路和方法,为临床控制甚至是治愈肝癌提供了新的可能。

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前言

材料和方法

1.实验材料

方法

实 验 结 果

1重编程过程伴随肝癌细胞凋亡

2被重编程的肝癌细胞肿瘤生物学行为丧失

3被重编程的肝癌细胞获得正常肝细胞特征和功能

4小分子化合物抑制肿瘤相关信号通路蛋白的活性

讨论

结论

参考文献

综述：细胞重编程技术

致谢