口腔癌发病风险预测模型构建及相关长链非编码RNA的筛选和验证

摘要

目的：
　　探讨口腔癌发病的环境影响因素,构建口腔癌发病风险预测模型;筛选口腔癌组织和癌旁组织中差异表达的长链非编码RNA,扩大样本验证并进行体外细胞功能学实验的机制研究.
　　方法：
　　1.采用病例对照研究设计,面访调查1012例口腔癌新发病例和3087例健康对照,收集研究对象的饮食和生活方式等环境暴露资料.采用非条件Logistic回归模型方法评估环境因素对口腔癌发病风险的调整比值比及其95%的可信区间.
　　2.根据多因素Logistic回归筛选出的口腔癌独立影响因素,基于OR值、β系数及nomogram方法构建三种口腔癌发病风险预测模型,利用ROC曲线下面积评估预测模型的预测效能.
　　3.利用Agilent Human lncRNA4×180K基因芯片技术筛选3对口腔癌组织和癌旁组织中表达差异的lncRNAs,采用qRT-PCR方法在81对口腔癌和癌旁组织中验证其中5条lncRNAs的表达水平.采用t检验或Wilcoxon秩和检验、X2检验分析两组间的差异及与患者肿瘤病理特征的关联.
　　4.构建lncRNA ENST00000470447.1过表达重组质粒和空白对照质粒,通过CCK-8、Transewell、细胞划痕以及流式细胞术等实验探讨lncRNA ENST00000470447.1过表达对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖、迁移、侵袭和调亡能力的影响.
　　结果：
　　1.吸烟、饮酒、中重度烹饪油烟、高口腔卫生指数(不良口腔卫生状况)是口腔癌发病的危险因素.饮茶、较高频率摄入鱼类、其他海鲜、新鲜蔬菜水果和蛋类可降低口腔癌的发病风险.
　　2.根据nomogram构建的口腔癌发病风险预测模型表现出最佳的预测效能(AUC=0.721,95%CI：0.702~0.739),且该预测模型的分值与口腔癌的关联强度呈非线性剂量-反应关系.Nomogram预测模型分值与肿瘤家族史之间存在相乘及相加交互作用(OR相乘=2.83,95%CI：2.20~3.64).
　　3.通过lncRNA表达谱芯片检测发现口腔癌与癌旁组织之间差异表达的lncRNAs,总共2617条,约占总lncRNA的8.97%(2617/29187)：其中上调280条,下调2337条.
　　4.ENST00000470447.1、ENST00000412353.1和ENST00000506106.1在口腔癌组织中的相对表达水平均低于配对癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.001),且验证结果与芯片检测结果的表达方向一致.
　　5.ENST00000470447.1表达水平与口腔癌患者的病理类型和分化程度相关(P<0.05),ENST00000506106.1的表达与患者的病理类型和淋巴结转移有关(P<0.05).
　　6.体外细胞实验结果显示：与空白对照质粒相比,ENST00000470447.1过表达重组质粒可降低舌鳞癌细胞Tca-8113的存活率、迁移率和侵袭率,且细胞早期凋亡率明显增高.
　　结论：
　　1.吸烟、饮酒、中重度烹饪油烟和不良口腔卫生状况是口腔癌发病的主要危险因素.规律饮茶、多食鱼类、其他海鲜、新鲜蔬菜水果和蛋类是口腔癌的保护因素.
　　2.根据nomogram构建的口腔癌风险预测模型具有最佳的预测效果和应用价值.
　　3.ENST00000470447.1、ENST00000412353.1和ENST00000506106.1在口腔癌中表达下调.
　　4.ENST00000470447.1和ENST00000506106.1与口腔癌患者的病理类型、分化程度和淋巴结转移存在关联.
　　5.ENST00000470447.1过表达可抑制Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡,在口腔癌的发生进程中发挥重要调控作用.

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