葫芦科作物种子中番木瓜环斑病毒的分子检测

摘要

葫芦科作物有多种种传病毒，植物检疫部门如何同时快速检测这些病毒的问题有待解决。番木瓜环斑病毒(PapayaRingspotVirus，PRSV)是葫芦科作物的种传病毒之一，本研究开展了葫芦科作物种子上的PRSV的分子检测研究，可以为解决上述问题提供借鉴。 以海口、扶绥、郑州、漳州等地采集回来的叶片样品为材料，首先通过双抗体夹心酶联免疫吸附分析(DAS-ELISA)的方法对所采集的叶片样品进行检测。在获得初步结果的基础上利用RT-PCR的方法进行检测。在确认叶片所携带的病毒为PRSV后，利用梯度PCR的方法及调整TaqDNA聚合酶浓度的方法确认退火温度为56℃的条件下使用2U的Taq酶可获得最佳RT-PCR检测结果。在优化后的PCR条件下，以西葫芦种子为样品，采取液氮研磨及TRIzol的方法提取PRSV的总RNA并进行检测，同时播种获得叶片后用DAS-ELISA的方法进行验证。最终建立一套可以直接从种子中检测PRSV的RT-PCR检测方法，为检疫部门提供了可以参考的快速检测番木瓜环斑病毒的分子方法。 已有的方法主要针对发病叶片的检测，本研究建立了基于种子的葫芦科作物PRSV的分子检测方法，很有实用前景。

目录

独创性声明及论文使用授权的说明

摘要

1引言

2材料与方法

3结果与分析

4讨论与小结

参考文献

附录1缓冲液的配制

附录2缩写词和英汉对照

附录3 DAS-ELISA数据处理及结果判断

致谢